（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
ELISA试剂盒在的实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。如双抗体夹心法、间接法、竞争法、双位点步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。
ELISA试剂盒以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在种固相载体-聚苯yi烯微量滴定板的孔中进行，每加入种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
应用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
ELISA试剂盒TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品的浓度。
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