本试剂盒仅供科研使用
土壤α-木糖苷酶（Solid-β- xylosidase）测定试剂盒说明书
（货号：WS3330W 微板法 48 样）
一、产品简介：
α-木糖苷酶(EC 3.2.1.177)是一类木聚糖降解水解酶，存在于微生物等生物体，促使非
还原末端α-D-木糖残基的水解，释放出α-D-木糖。
土壤中α-木糖苷酶催化对硝基苯酚-α-D-木糖苷产生对硝基苯酚（PNP），该产物在
405nm 处有特征吸收峰，通过测定 405nm 光吸收增加速率，即可计算土壤α-木糖苷酶活
性。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用甩几下使试剂落入底部，
再加 1.4mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
液体 6mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液 22mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂×1 支
4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、蒸馏水。
四、土壤α-木糖苷酶活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本的制备：
取新鲜土样风干或者 37℃烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛网备用。
【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，bao证取样的均匀细腻；
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称
测定管
对照管
土样（
g）
0.1
0.1
试剂一（
μL）
25
蒸馏水
25
试剂二（
μL）
55
55
混匀， 45℃振荡反应 30min
试剂三（
μL）
220
220
混匀，12000rpm，离心 10min，取上清液 200μL 于 96 孔板中，405nm
下读取吸光值 A，△A= A 测定- A 对照（每个样本需做一个自身对照）。
【注】：1.若ΔA 过小，可以增加土样量或延长保温时间（如：60min 或更长），重新调整的
样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。
2.若 A 测定超过 1.5，可以减少土样量或降低保温时间（如：10min），重新调整的
样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用
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五、结果计算：
1、标准曲线方程：y=0.2647x-0.0058；x 为标准品质量（
μg），y 为吸光值ΔA。
2、单位定义：每小时每克土样中产生 1μg 对-硝基苯酚（PNP）定义为一个酶活力单位。
土壤α-木糖苷酶活性(μg/h/g 土样)=(ΔA+0.0058)÷0.2647÷W÷T=7.56×(ΔA+0.0058)÷W
T－－-反应时间，30min=0.5h；
W－－-实际称取干土质量，g；
PNP 相对分子质量－－-139.11。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 在 EP 管加入：20μL 标准品+5μL 蒸馏水+55μL 试剂二+220μL 试剂三，混匀，取 200μL
至 96 孔板中，于 405nm 下读取吸光值。
4 根据结果制作标准曲线。
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