本试剂盒仅供科研使用
土壤多酚氧化酶（Solid-Polyphenol oxidase，S-PPO）试剂盒说明书
(货号：WS1130W 微板法 96 样)
一、产品简介：
土壤多酚氧化酶(Polyphenoloxidase，简称 PPO)是一类以铜、锰为活性中心的氧化还原
酶，主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放的酶，能把土壤中芳
香族化合物氧化成醌，醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成大小分子
量不等有机质和色素，完成土壤芳香族化合物循环，也可用于土壤环境修复。
土壤多酚氧化酶能够催化底物左旋多巴产生红色的醌类物质，依据文献选择该有色产物
在 475nm 做为特征光吸收波长，通过测定进而计算得出土壤多酚氧化酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 110mL×2 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×3 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉剂落入底部，每瓶
加入 30mL 试剂一，超声溶解，溶解
后的试剂三天内用完。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、低温离心机、水浴锅/恒温振荡培养箱、可调式移液器。
四、土壤多酚氧化酶（S-PPO）的测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
取新鲜土样或风干土壤，先粗研磨，过 40 目筛网，待测备用。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 475nm。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
土样（
g）
0.1
0.1
试剂一
200
1000
试剂二
800
振荡混匀，25℃水浴（间隔 10min 振荡混匀几下）或恒温振荡培养
箱振荡孵育 1 h
孵育结束后立即于 4℃（需低温）12000rpm 离心 5min，取 200μL
上清液于 96 孔板中，于 475nm 处读取吸光值 A，△A=A 测定管-A
对照管（每个样本需做一个自身对照）。
【注】：1. 若 A 测定大于 1.8，可用蒸馏水对离心后待检测的上清液进行稀释，则稀释倍数 D 需代入公
式重新计算。
2. 若△A 值小于 0.01，可延长 25℃的孵育时间 T（如由 1h 可增加至 4h），则改变后的 T 需代入
公式重新计算。
五、结果计算：
1、单位定义：每小时每克土壤中产生 1nmol 红色产物定义为一个酶活力单位。本试剂盒仅供科研使用
2
S-PPO 活力(nmol/h/g 土样)=[ΔA÷(ε×d)×V1×109]÷W÷T×D=540.5×△A÷W×D
ε－－-红色产物摩尔吸光系数，3.7×103 L/mol/cm；
T－－-反应时间，1h；
V1－－-反应总体积，1000μL=1mL=1×10-3 L；
d－－-光径，0.5cm；
D－－-稀释倍数，未稀释即为 1；
W－－-土壤样本实际取样量，g。
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