分光光度计检定波长的工作原理

分光光度计光源发出的光线通过单色器后变成有定狭窄带宽的单色光，单色光通过安置在比色槽中的波长标准器后，标准器对光线有吸收作用，显示系统就会显示定的透射比（或吸光度），当单色光波长与波长标准器的特征波长致时，此时标准器对光线的吸收低（或高），在透射比模式下,对于单峰图谱，此时显示透射比为大，形成尖锐的单峰，对于多峰图谱会形成组系列的波峰或波谷。通过读取峰值对应的波长值就能得到标准值在仪器上对应的波长示值。

分光光度计工作波长的划分及计量性能要求

依据JJG178 —2007分光光度计工作波长的划分为3段,分别是A段（紫外光区），范围为190〜340nm；B段（可见光区段），范围为40〜900nm；C段（近红外光区），范围为900〜2600nm,分光光度计工作波长计量性能要求见表1。

常见检定波长用滤波片指标及适用范围

目,可获得的检定波长用标准器、根据标准器选型的三分之原则确定的适用范围见表20通过表1、表2可知，如果要使用上述滤波片检定更高别的仪器，需选择更高能力的机构标定滤光片，以减小标定数据的不确定度。事实上、滤光片的检定均使用I可见紫外分光光度计，而I可见紫外分光光度计的MPE= 土0・3（A段）、MPE= ±0・5（B段）。另外,受滤光片波长带宽较宽的限制，期待减小标定数据的不确定度来提升检定能力并不可行。要想提高检测能力，只能采用不确定度值更小的氧化钬溶液波长标准物质。

氧化钬溶液波长标准物质指标及适用范围

目、可获得的检定波长用标准溶液有以下两种，根据标准器选型的三分之原则确定适用范围见表3。

检定波长用标准器的选择

检定波长用标准器的选择须考虑待选标准器的峰值的分布范围、标定数据的不确定度，以此确定能检定分光光度计的别。JJG178 — 2007《紫外、可见、近红外分光光度计检定规程》对波长标准物质的选择已有具体的规定，现就从实际工作中的情况和可操作性方面分析检定波长用标准器的选择。

介质膜干涉滤光片光谱为单峰波形适合检定手动调节波长的分光光度计，错放滤波片、氧化钬滤波片光谱均为多峰波形适合检定自动扫描波长的分光光度计。在实际工作中、可见分光光度计都是手动调节波长，且等均为III、IV,紫外-可见分光光度计手动调节波长、自动扫描波长两种方式都存在。因此、检定可见分光光度计时，使用介质膜干涉滤光片佳，使用错钱滤波片可操作性较差。检定手动调节波长紫外-可见分光光度计时,可使用介质膜干涉滤光片检定B段，氧化钬滤波片检定A段，不考虑操作性差这因素，也可以只使用氧化钬滤波片检定A段、B段。检定自动扫描波长紫外-可见分光光度计时，同时使用氧化钬滤波片、错钱滤波片可测得240〜820nm范围内的峰值点，弥补了单独使用氧化钬滤波片只能测得240〜640nm范围的峰值点，所测波长范围较短的缺陷，比较符合JJG178-2007中要求每隔100nm至少选择个波长检定点的要求。

另外、在选择介质膜干涉滤光片时，需注意波长半宽

结论

检定波长用标准器的选择，应当遵循适用、方便、经济的原则，根据本单位检定校准市场需求确定标准器,适合的才是好的。