乳酸含量（lactic acid，LA）试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意：正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量
代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。
测定原理
乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使 NAD+还原生成 NADH 和 H
+，H
+传递给 PMS
生成的 PMSH2 还原 INT 生成红色物质，在 530nm 处有特征吸收峰。
天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
提取液：液体 110mL×1 瓶，4℃保存。
试剂：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 支，-20℃避光保存。临用加入 0.6mL 蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用加 6mL 蒸馏水充分溶解。
试剂五：粉剂×1 支，4℃避光保存。
标准品：液体 1mL×1 支，4℃保存。
显色液：临用根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1：
0.3：3：15（mg）的比例充分混匀。
样本处理
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL
提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，12000g 离心 10min，取上清测定。
2. 细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500
万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 ，间隔 7 ，
总时间 3min）；于 4℃，12000g 离心 10min，取上清测定。
3. 血清：直接测定。
测定操作
空白管 样品对照管 样品测定管 标准对照管 标准测定管
样品（μL） 10 10
标准品（μL） 10 10
H2O（μL） 100 60 90 60 90
试剂（μL） 30 30
试剂二（μL） 40 40 40 40 40
显色液（μL） 60 60 60 60 60
充分混匀，于 37℃反应 30min，于微量石英比色皿/96 孔板，空白管调零，测定 530nm 处吸
光值，分别记为 A1，A2，A3，A4，△A 样=A2-A1；△A 标= A4-A3
注意：空白管、标准对照管和标准测定管只需测定次
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1. 按照蛋白含量计算
LA 含量（μmol/mg prot）= △A 样÷△A 标×C 标÷ Cpr
= 2×△A 样÷△A 标÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
LA 含量（μmol/g）= △A 样÷△A 标×C 标÷ W
= 2×△A 样÷△A 标÷ W
3. 按照细胞数量计算
LA 含量（μmol/104
cell）= △A 样÷△A 标×C 标÷ 细胞数量
= 2×△A 样÷△A 标÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
LA 含量（μmol/mL）= △A 样÷△A 标×C 标
= 2×△A 样÷△A 标
C 标：标准品浓度，2mmol/L
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1. 按照蛋白含量计算
LA 含量（μmol/mg prot）= △A 样÷△A 标×C 标÷ Cpr
= 2×△A 样÷△A 标÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
LA 含量（μmol/g）= △A 样÷△A 标×C 标÷ W
= 2×△A 样÷△A 标÷ W
4. 按照细胞数量计算
LA 含量（μmol/104
cell）= △A 样÷△A 标×C 标÷ 细胞数量
= 2×△A 样÷△A 标÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
LA 含量（μmol/mL）= △A 样÷△A 标×C 标
= 2×△A 样÷△A 标
C 标：标准品浓度，2mmol/L；W：样本质量，g/mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL
注意事项
1. 空白管、标准对照管、标准测定管只需做次。
2. 若吸光值超过 2，请进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 低检出限为 1.8μmol/L。
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