支原体污染在世界范围内的细胞实验室中，属于比较常见的一类污染。细胞污染一旦污染了支原体，会给细胞培养带来一系列严重的后果。

本期内容，就细胞培养过程中，支原体污染的危害、如何预防支原体污染、如何祛除支原体污染做全方位的解读。

一

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支原体污染的危害

支原体个头很小，可以感染多种真核细胞系，包括研究中常用的人类和动物细胞系。虽然支原体感染的前期，可能并不总是导致受感染细胞发生明显变化，但它会对细胞生理学和实验结果产生重大影响。

支原体影响细胞生长的主要方式之一是改变细胞代谢。支原体已被证明会耗尽培养基中的葡萄糖和氨基酸等营养物质，从而导致细胞生长和增殖减少。此外，支原体会产生对细胞有毒的代谢废物，例如过氧化氢和氨。

支原体感染还可以改变受感染细胞中基因和蛋白质的表达。研究表明，支原体可以诱导基因表达和可变剪接的变化，从而导致蛋白质表达和细胞功能的改变。例如，支原体感染已被证明可以下调参与细胞周期调节的基因，并上调参与炎症和免疫反应的基因。

支原体影响细胞生长的另一种方式是诱导细胞应激反应。支原体感染已被证明可激活细胞应激通路，如未折叠蛋白反应和自噬，这可导致细胞功能改变和细胞活力降低。

支原体还会影响受感染细胞在检测和实验中的行为。支原体污染会导致实验结果的可变性增加、再现性降低以及假阳性或假阴性结果的产生。此外，支原体可以改变细胞对药物和其他刺激的反应，这可能导致关于药物疗效或毒性的错误结论。

总之，支原体污染会对细胞生长和行为以及实验结果产生重大影响。研究人员应采取适当措施预防、检测支原体污染。

二

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支原体污染的预防

防止支原体污染的第一步是保持无菌实验室环境。所有设备和表面都必须使用适当的试剂定期清洁和消毒，培养箱水槽等水浴环境，也应防止消毒剂成分。此外，在处理细胞培养物时应佩戴手套和实验室外套等个人防护设备，以防止意外污染。

德国Minerva Biolabs生产

支原体祛除喷雾

Mycoplasma-off

德国Minerva Biolabs生产

水槽支原体预防试剂

Water Shield

另一个重要措施是在细胞培养过程的所有步骤中使用无菌试剂和培养基。这包括使用无菌移液器、过滤器和其他一次性设备。所有培养基和试剂都应适当储存以防止污染。

应尽可能使用之前经过测试和证明不含支原体的细胞系。定期检测细胞培养物是否存在支原体污染也很重要，即使使用经过认证的细胞系也是如此。

三

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支原体的检测

如何检测支原体前期内容我们也有详细讲过，有常规PCR检测试剂盒以及qPCR检测试剂盒两大类可供选择。

具体内容可以参考下面这篇文章：

『支原体检测方法』到底应该怎样选？

四

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支原体的祛除

如果在细胞培养物中检测到支原体污染，必须立即采取措施消除污染。第一步是将受影响的培养物与其他细胞培养物隔离，以防止污染扩散。

受影响的培养物应该被丢弃，并对环境进行彻底的清洁，参考支原体预防这一章节的内容。新的培养物应该从冷冻储备或无支原体细胞系开始。

针对不同类型的培养物，还可选择用于细胞中的支原体祛除试剂：

Zell Shield

对于费力扩增的细胞（如已染，或经过体外刺激），如果细胞中发现有支原体污染，但此细胞又不愿丢弃，希望继续培养，推荐使用MB公司生产的复合抗生素Zell Shield。

Mynox

无法长期培养的珍贵样本或病毒收获液，则推荐使用德国MB公司的Mynox® ，处理3小时，直接杀除。

Mynox Gold

可以培养超过一个月的细胞，则推荐使用德国MB公司的Mynox® Gold，直接杀除+巩固防护两步处理。