通用名：鸡传染性法氏囊抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Diagnostic Kit For Antibodies To Infectious Bursal Disease Virus (ELISA)

【包装规格】96T×1/盒

【预期用途】鸡传染性法氏囊是由传染性法氏囊病毒（Infectious Bursal Disease Virus，IBDV）引起的以破坏鸡的中枢免疫器官——法氏囊为主要发病机理的病毒性传染病，该病病毒损伤法氏囊而导致免疫抑制，使病鸡对大肠杆菌、沙门氏菌、鸡球虫等病原更易感。

本试剂盒适用于：测定鸡血清中鸡传染性法氏囊病病毒抗体的相对水平。可用于评估鸡群鸡传染性法氏囊病病毒疫苗免疫状况分析。

【原理】

本试剂盒由预包被鸡传染性法氏囊VP2抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测鸡血清或血浆中鸡传染性法氏囊病毒抗体。实验时，在酶标板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有鸡传染性法氏囊病毒的抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有传染性法氏囊病毒抗体。

【试剂盒组成】

【储存及有效期】2～8℃保存，有效期12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

【适用仪器】含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用试剂盒提供的样本稀释液将样本作40倍稀释（如5ul血清加入195ul样本稀释液）稀释的样本混合均匀能取得较好结果。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释成工作洗涤液(如10ml浓缩洗涤液加入90ml的去离子水中)。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3. 阴性对照、阳性对照孔分别加入阴性对照血清、阳性对照血清（不用稀释）100μl；样品孔每孔加入稀释好的待测样本100μL。

4.加样后，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。

5.甩去孔内液体，每孔加满工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。

6.每孔加酶标记物100μl。盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液100μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl，充分混匀，终止后读数。

【参考值】实验正常的情况下，当样本的S/P≥0.2时判为阳性；样品S/P值＜0.2时判为阴性

【检验结果的解释】

在酶标仪上测各孔的OD值。检测结果有效的条件是阳性对照孔的平均OD值≥0.6，阴性对照孔的平均OD值必须＜0.15；样品中抗体存在与否，或样本中抗体的相对水平的高低由S/P值决定，S/P值计算时按以下方式处理:

S/P=(样本OD450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示阴性对照孔平均OD450/630值，PCx(—)表示阳性对照孔平均OD450/630值。

【试验方法的局限性】

1．严重溶血、血清中纤维蛋白分离不充分、含红血球样本可能导致假阳性；长菌的样本可能导致假阴性。

2．因个体差异或免疫时间长短等因素可能会出现个别鸡只免疫疫苗后检测结果为阴性。

3．阳性结果用于感染鸡的血清学诊断以及流行病学调查时需结合其他诊断方法和临床资料进行分析。。

【注意事项】

1．使用试剂盒之前，一定要仔细阅读说明书。

2.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

3.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

4.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

5.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

6.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

7.用于检测的样品应保持新鲜。

8.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

9.不同批号试剂组分不得混用。