摘要 ：Agilent Chem Elut S 是一款使用合成吸附剂进行固相支持液液萃取 (SLE) 的全新样品 前处理产品。本应用简报介绍了采用 Chem Elut S 96 孔板 (400 mg) 对人体尿液中的 24 种滥用药物 (DOA) 进行 LC/MS/MS 定量分析。使用 β-葡萄糖醛酸酶对尿液样品 进行酶解，然后加载到 Chem Elut S 400 mg 96 孔板上。将水相样品吸附到填料中并 平衡 5 分钟，然后用甲基叔丁基醚 (MTBE) 洗脱得到含目标分析物的洁净萃取物。对 该方法的准确度和精度进行验证，除一种化合物外，其余化合物均得到了出色的回 收率 (100% ± 20%) 和精度 (%RSD < 20%)。与传统的液液萃取 (LLE) 法和硅藻土 SLE 法相比，该法具有明显优势。结果表明，基于合成 SLE 吸附剂的 Chem Elut S 为本 应用提供了快速、简单而一致的样品前处理。


前言 ：在法医毒理学中，生物样本中 DOA 的快 速、可靠定量在法医学检测领域引起了极 大关注[1–3]，主要原因是 DOA 和提交分析 的样品数量日益增多。DOA 尿液检测是 用于人体中 DOA 筛查和定量最常见的法 医学检测手段之一。尿液基质没有其他生 物基质（如血浆和血清）那么复杂。而其 中含有大量不同的盐类，会对检测可靠性 和仪器可用性造成影响。因此，基质净化 和 DOA 萃取前需要进行适当的样品前处 理。此外，对于以下萃取和分析，在样品 前处理之前，通常需要对 DOA 分析物进 行糖基化并使用 β-葡萄糖醛酸酶进行酶 解，以释放游离药物[4]。 常用的 DOA 分析样品前处理技术包括 LLE、固相萃取 (SPE) 和 SLE。LLE 步骤 较为繁琐，需要大量的样品混合、手动 相分离，以及不定时的离心来破坏乳浊 液。此外，LLE 与 SLE 相比因过程繁琐难 以实现自动化。在传统的 SLE 中，将水 相样品加载到含硅藻土 (DE) 的吸附剂柱 床，其中的水相样品以薄膜形式涂覆在材 料上。然后让与水不混溶的溶剂通过 SLE 柱床，从样品中提取出目标分析物，并将其洗脱至收集管用于后续处理和分析。与 传统 LLE 相比，使用 SLE 时水相和有机 相表面之间的相互作用明显增强，从而改 善了从水相到有机相的分析物分配，成功 替代了混合步骤。与传统 LLE 相比，SLE 节省了大量的时间和人力，并简化了操 作，提高了重现性。

此外，DE 是一种由不规则石化微生物组 成的天然材料，难以控制吸附剂颗粒批 次间的一致性。吸附剂的多样性使产品 生产和质量控制复杂化，并导致产品性 能的不一致。与合成填料相比，DE 的 持水量更低且各不一致。Chem Elut S 吸附剂极大提高了持水量，改善了批 间一致性和性能一致性。96 孔板的设 计为样品和洗脱液提供了较大的顶空， 在施加压力/真空前，上方的方形筛板可 以放置样品，设计的全裙板可实现硬件兼 容性以及快速、一致的洗脱。 本研究采用 Chem Elut S 2 mL 96 孔板 (400 µL) 定量测定人体尿液中的 24 种 DOA。并根据回收率、重现性和易用性， 对 Chem Elut S、LLE 和基于 DE 的 SLE 进行了实验比较评估。


实验部分 所有试剂和溶剂均为 HPLC 或分析纯 级。甲醇 (MeOH) 和乙腈 (ACN) 购自 Honeywell (Muskegon, MI, USA)，甲 基叔丁基醚 (MTBE) 购自 VWR-BDH Chemicals (Radnor, PA, USA)。浓盐 酸溶液（HCl，38%）购自 VWR。混 合 DOA 标准储备液来自安捷伦科技公司 （部件号 5190-0470），内标 (IS) 储备液 (1 mg/mL) 来自 Cerilliant (Round Rock, TX, USA)。β-葡萄糖醛酸酶为溶液形 式（100000 单位/mL），购自 SigmaAldrich (St. Louis, MO, USA)。人体尿液 (Mass Spect Gold) 购自 Golden West Biologicals, Inc. (Temecula, CA, USA)。每 批次使用前配制新鲜试剂溶液，避免浓度 变化。


标样和溶液 用适当体积的单独储备液在甲醇中稀释配 制混合标样和 IS 中间加标溶液，浓度为 20 µg/mL。所有加标溶液在使用前均于 –20 °C 下储存。


设备和备件 • Agilent Chem Elut S 400 µL （部件号 5610-2004） • 安捷伦正压多孔处理装置，PPM-96 （部件号 5191-4116） • 安捷伦方形 96 孔 2 mL 收集板 （部件号 5133009） • 安捷伦方形 96 孔密封盖 （部件号 5133005） • SPE 96 蒸发器 • 多管涡旋仪 (VWR, PA, USA) • Eppendorf 移液管和重复用移液器 • ViaFlo 96 液体处理器 (Integra, Hudson, NH, USA)仪器条件 • Agilent 1290 Infinity 四元泵 (G4204A) • Agilent 1290 Infinity 自动进样器 (G4226A) • Agilent 1290 Infinity 柱温箱 (G1316C) • Agilent 1290 Infinity 恒温器 (G1330B) 表 1 列出了分析物采集参数，图 1 显示了 尿液中 1 ng/mL DOA 的 LC/MS/MS 色谱 图。按照洗脱顺序的峰归属如表 1 所示。


结果与讨论 线性 使用 Agilent Mass Hunter 定量分析软件 处理数据。使用线性回归拟合和 1/x2 加 权得到所有目标药物的校准曲线，其 R2 值均在 0.991–0.999 之间。 回收率与重现性 本研究获得了良好的结果，结果汇总如 表 2 所示。除普罗地芬以外，其余所 有分析物的回收率为 79.3%–117.4%， RSD < 16%。普罗地芬的回收率始终较低 （SLE 和 LLE 方法的回收率均约为 55%， 但有良好的灵敏度和较高的重现性 (RSD 6.2%–11.2%)）。除安非他明和海洛因出 于基质干扰或方法灵敏度的原因 LOQ 为 0.5 ng/mL 外，其余化合物的 LOQ 均为 0.1 ng/mL。