提供者：上海瑞齐生物科技有限公司 发布时间：2020/6/26 16:26:50 阅读次数：301次 进入该公司店铺
然而，要想得到一张高质量的免疫组化染色切片也并非易事。由于切片制作和免疫组化染色过程均存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都需要操作者严格控制实验条件，否则可能会影响到zui终结果。现就试验中遇到得常见问题进行分析总结，给进一步给出解决方案，希望能为帮助相关实验人员提供实验成功率。
免疫组织化学实验中的常见问题及其解决方法：
| 出现的问题 | 可能的原因 | 处理方法 |
| 染色阴性 | 试剂失效 | 重新试验，设立阳性对照 |
| 漏加试剂 | ||
| 试剂加入顺序颠倒 | ||
| 组织中无目的抗原表达或表达量太低 | 查阅文献或数据库，确定组织中确有目的蛋白强表达。设立阳性对照片，以验证实验结果 | |
| 一抗与二抗种属不匹配 | 仔细确定一抗与二抗种属无误，如果一抗来源于兔，则二抗需选择抗兔二抗，了解一抗的类型，如果一抗是小鼠IgG1，那么二抗应选择抗小鼠IgG1 | |
| 抗体不足 | 提供抗体量，延长孵育时间，如4度反应过夜 | |
| 组织未进行抗原修复 | 有些组织需要经过抗原修复才能检测抗原表达 | |
| 在固定和包埋过程中，抗原变形导致表位变化 | 采用多种抗原恢复方法 | |
| 包埋时控制温度在58度或低于58度 | ||
| 冲洗液与反应试剂不匹配 | 调整溶液PH值，注意过氧化物酶底物匹配的溶液中不应含有叠氮钠 | |
| 染色弱 | 抗体浓度过低 | 提高抗体浓度，孵育时间不能少于60分钟 |
| 抗体孵育时间过短 | 抗体孵育时间不能少于60分钟 | |
| 标本中目的蛋白表达量低 | 查阅文献或数据库，确定组织中确有目的蛋白强表达。设立阳性对照片，以验证实验结果 | |
| 操作中，切片遗留太多冲洗液，导致试剂稀释 | 每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液（但防止切片干燥） | |
| 孵育时切片未放平，导致抗体流失 | 孵育时，注意切片应水平放置 | |
| 蛋白封闭过度 | 封闭时间不要超过10分钟 | |
| 不适当的标本固定方式 | 选择合适的固定方法 | |
| 不适当的抗原修复方式 | 延长抗原修复时间，或者调整抗原修复体系，建议参照生产厂家的说明，同时结合标本的具体情况来确定 | |
| 非特异性背景染色，全片着色 | 抗体浓度过高 | 降低抗体浓度 |
| 抗体孵育时间过长 | 严格执行操作规程，建议使用定时器及时提醒，避免造成时间延长 | |
| 孵育温度过高，孵育温度超过37度 | 建议控制孵育温度 |
关键词：（IHC）免疫组织化学常见问题解答
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