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一、所谓的单波长比色等于通常的以对显色具有最大吸收的波长如450nm或492nm进行比色测定；
二、而双波长双色则酶标仪在敏感波长如450nm和非敏感波长630nm下各测定一次，敏感波上下的吸光度测定值为样本测定酶反应特异显色的吸光度与板孔上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和；
三、非敏感波长下测定即改变波长至一定值，ELISA试剂盒使得样本测定酶反应特异显色的吸光度值为零，此时测得的吸光度即为脏物的吸光度值。 以TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用，而前者比色波长为450nm，后者为492nm，滤光片需根据要求随时更换。最后酶标仪给出的数值为敏感波长下的吸光度值与非常感波长下的吸光度值的差。以软板为载体的试验，需先将板置于尺度96孔的座架中，才可进行比色。ELISA试剂盒比色时应先以蒸馏水校零点，测读底物孔。
因为ELISA试剂盒测定中单个空缺孔的非特异吸收上有一定程度的不确定性，也就是说每次测定或同次测定空缺孔位置的不同均有可能得到不同吸光度测定值，所以在ELISA测定比色时，最好是使用双波长比色。因此，双波长比色测定具有能排除由微滴板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光度的影响的长处。
另外，上海恒远特别提醒大家，在操作过程中，在ELISA实验测定中，还要注意：稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。想要了解更多ELISA技术知识，欢迎您登陆我公司网站查询，最新产品目录、操作技术抢先看！或来电咨询我司业务员领取更多干货内容！
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