我们都知道，各种酶都有对底物的特异性，所以使用不同种类的酶要求有不同的底物。在elisa试剂盒实验中，加底物后多长时间终止反应测定结果呢？经上海恒远公司ELISA技术专员解析，一般可采取以下这两种方法：
第一、任意确定一个时间，如20分钟或30分钟终止反应，测定被检标本和阳性参考标本的O.D值。
第二、制备好一批酶结合物后预试时间，在反应温度固定时，当阳性参考血清O.D值达到1.0时终止反应，记录这个时间，如30分钟，以后用本批酶结合物测定待检样品时都采用同一时间终止反应，这个办法不需要校正，比较方便。
国外在使用自动测定仪时，加底物后随时测定，每块试验板上阳性参考血清的O.D值，当其达到1.0时，立即将全板上被试标本终止反应进行测定，这样所得结果比较一致。我国也有自动酶标测定仪，但由于固相载体不够均匀，也很难用板来直接测定。
在ELISA中所加酶结合物之浓度，加后孵育时间以及加底物后孵育时间。这三个因素也是互相有影响的。一般讲，酶结合物浓度低，则要求孵育时间长些，而酶结合物浓度高则要求孵育时间短些，可根据实验的具体情况，变更不同因素，以取得良好的结果。
由于ELISA中变异因素多，对于要诊断某一疾病时，必须进行一系列实验室预试，摸索，或叫实验研究，在酶结合物已经确定的情况下，一般要求预测以下5个条件：
1.抗原包被浓度；
2.被检血清稀释度，即测剂量反应曲线；
3.抗体作用时间；
4.酶结合物作用时间；
5.底物作用时间。
一旦试验条件摸清，以后在正式测定时，必须固定条件，不要随时改变，以使试验系统保持足够的稳定性。了解更多内容欢迎您来电咨询我公司业务员，也可以在本公司网站上方的在线订单中给我们留下您需要的产品。我司试剂盒产品提供全程实验技术指导，实验技术、完善、稳定，购我公司产品为您包邮送货上门！
版权声明