质粒DNA醇化一


从质粒DNA制品中去除RNA

对于某些用场（例如用BAL31进生存化或用T4噬菌体多核苷酸激酥标记质粒DNA的限止切断片的5＇端）,务必取得无RNA污染的DNA制品。尽管在经过氯化铯-溴化乙锭梯度均衡离心所制备的质粒DNA中,这么的RNA污染物的品质很少,但那里面的RNA分子数却有可能相当可观,并可在限止酶克化反响的所有5＇端中占领较大的比例。经过下述办法,可以从质粒制品中去除RNA。经过Bio-Gel A-150m或Sepharose CL-4B施行层析

1、制备质粒DNA。

2、有等大小的经TE（pH8.0）均衡后的酚抽提1次真空干燥箱。

3、当使聚在一起到15份时,关闭柱底部,为明确质粒DNA的散布事情状况,可在每份使聚在一起物中取10μg样品,经过0.7百分之百石花胶糖凝胶电泳或溴化乙锭荧光施行剖析。

4、将DNA装入层柱并在柱的上部连署上含0.1百分之百SDS的TE（pH8.0）的贮液瓶,迅即着手以0.5ml流出液为1流施行使聚在一起。

5、将至多1ml的水相铺在经TE（pH8.0）和0.1百分之百SDS均衡的Bio-Gel A-150m或Sepharase CL-4B（1x10cm）柱上。

6、将含质粒DNA的组成合并在一块儿,加2倍大小的酒精于4℃沉淀10min,而后以4℃大于10 000rpm离心15min,以回收DNA。