如何祛除细胞上的支原体污染？

据研究表明，约98％的支原体存在于细胞表面和细胞间隙。支原体直径约180~350nm，比细胞小很多，经低速离心与细胞分离。通过反复悬浮冲洗、离心，加上使用我们的Zell Shield®，即可在细胞培养四代以内有效地祛除支原体。

什么是Zell Shield®？

Zell Shield®是一种链青霉素类复合抗生素，

对细胞影响很小，可以有效抑制细胞培养中的

支原体、细菌、霉菌、真菌等微生物增殖。

普通的链霉素、青霉素对支原体没有效果。

那为什么Zell Shield®有效呢？

因为Zell Shield®是由Minerva公司生产的专门针对支原体的抗生素。

德国Minerva公司是由全球著名的罗伯特·科赫研究所中分离出来的，专注于支原体、细菌的污染控制，尤其以支原体和军团菌的祛除、检测而闻名。Zell Shield®是Minerva公司的一项专利产品，不但对细胞培养中的细菌、真菌、霉菌有效，更是对支原体的祛除有确切效果。

具体是怎么操作呢？

1.首先把被支原体污染的细胞消化下来，

放入离心管离心，弃上清。

再加入干净的PBS悬浮冲洗细胞、

低速离心（300~500r/min）、弃上清，

反复三次。

这样可祛除细胞表面60％~70％的支原体，

支原体还剩约30％~40％.

2.细胞加入含1％Zell Shield®的新鲜培养基，

传代培养。

这时因培养基中Zell Shield®的抑制作用

细胞培养过程中，

虽然细胞增殖，但残留的支原体无法增殖。

细胞需再次传代时，把第二代细胞消化下来，

离心，弃上清。

加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清，

反复三次，

这时，细胞上残留的支原体大约已剩余为最初污染量的10％左右。

3.细胞加入含1％Zell Shield®的新鲜培养基，

传代培养。

需再次传代时把第三代细胞消化下来，

离心，弃上清。

加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清，

反复三次，

可再次祛除60％~70％的残余支原体，

通过冲洗、抑制、换液等操作，

细胞中支原体的残留污染量大约只剩3％左右。

4.细胞加入含1％Zell Shield®的新鲜培养基，

传代培养。

需再次传代时把第四代细胞消化下来，

离心，弃上清。

加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清，

反复三次，

可再次祛除60％~70％的支原体，

此时，支原体残留量大约已低于1％.

支原体的增殖亦有密度要求，

用Zell Shield®处理过四代的细胞，

即便撤掉Zell Shield®，

只要保证没有新的支原体人为再次带入，

原有支原体也无法再增殖，

随着传代，换液，支原体的老化、死亡，

细胞中的支原体污染基本就彻底解决了。

敲黑板，划重点啦

1.每次传代时，重复三次对细胞悬浮冲洗步骤非常重要，操作要正确、规范，以达最佳效果！

2.在培养基中加入1％Zell Shield®抑制支原体增殖！

3.使用安全的血清、培养基等试剂，不再有新的支原体加入！

做到以上三点即可确保祛除支原体污染。

Zell Shield®工作原理是什么？

支原体祛除剂Zell Shield®（培养基用）

是一种即用型链青霉素类的复合抗生素，

在培养基中1%的浓度

通过阻止原核生物DNA及蛋白的合成，

抑制细胞培养中遇到的

细菌、真菌、霉菌增殖，

更可以有效、精确地抑制支原体增殖，

且对细胞基本安全。

品名：支原体祛除剂Zell Shield®（培养基用）

生产商：Minerva Biolabs GmbH

生产地：德国

货号：13-0050

规格：50mL/瓶

储存温度：-18℃

使用注意事项：实验室初次使用，注意分装，分装后的小包装Zell Shield®仍-20℃避光冷冻保存，现配现用。

市场价格：2200元

货期：大多数时间国内有现货