2、将试剂一在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）中保温 15min 左右。
将上述试剂按顺序加入微量石英比色皿/96 孔 UV 板中混匀，在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种），340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和反应 1min 后的吸光度 A2，计算ΔA=A2-A1。
注意事项：
1、若 A2-A1 大于 0.5，需将酶液用提取液稀释，使 A2-A1 小于 0.5，可提高检测灵敏度。
2、实验时，试剂三、试剂四和样本在冰上放置，以免变性和失活。试剂一 37℃或 25℃水浴放置。
3、比色皿中反应液的温度必须保持 37℃或 25℃，取小烧杯一只装入一定量的 37℃或 25℃蒸馏水，将此烧杯放入 37℃或 25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。用 96孔板做时尽量保持反应温度在 37℃或 25℃。
4、好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。用 96 孔板做时尽量做到样本反应时间一致。
5、如果ΔA＜0.01，可将反应时间延长 5 分钟或 10 分钟。
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