很多年后，我们把这个夏天叫做“那年夏天”，但是那年夏天，我们曾笑得很美，很绚烂… 让我们在这个夏天一起走进免疫组化问题，上海劲马一一为您解答
1、染色过强
原因及相关解决方法
a 抗体浓度过高或孵育时间过长 降低抗体滴度、抗体孵育时间：室温1小时或4度过夜
b 孵育温度过高超过37度 一般在室温20-28度
c DAB显色时间过长或浓度过高 显色时间不超过5-12分钟，以显微镜下观察为准
2、非特异性背景染色
原因及相关解决方法
a 操作过程中冲洗不充分： 每步冲洗3次每次5分钟
b 组织中含过氧化物酶未阻断 ：可再配置新鲜3%H2O2封闭孵育时间延长
c 组织中含内原性生物素：正常非免疫动物血清再封闭
d 血清蛋白封闭不充分：延长血清蛋白封闭时间
3、染色弱
原因及相关解决方法
a 抗体浓度过低、孵育时间过短：提高抗体浓度、孵育时间不能少 于60分钟
b 试剂超过有效使用时间： 应更换试剂
c 操作中添加试剂时缓冲液未沥干 ：每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液
使试剂稀释 （应防止切片干燥）
d 室温太低 ：低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分钟或4 度冰箱过夜
e 蛋白封闭过度：封闭不要超过12分钟
4、染色阴性
原因及相关解决方法
a 操作步骤错误：应重试设阳性对照
b 组织中无抗原：设阳性对照以验证试验结果
c 一抗与二抗种属连接错误：仔细确定一抗二抗种属无误
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