改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已

经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因检测的

快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。本产品就是为满足

这一需求根据 PCR 原理开发的产品，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA。

2. 根据大豆保守区域设计引物，能专一性地检测出样品中的大豆成分，但不能检测其

他非大豆成分。

3. 荧光定量 PCR 检测，比常规 PCR 更加灵敏。

4. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。

5. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。

6. 提供阳性标准品，便于分析实验结果。

7. 对混合样品中大豆成分的检测下限为 0.01%，对样品中大豆成分的核酸检测下限为

0.1ng/µL。

8. 本只能用于科研，足够 50 次 20uL 体系的荧光定量 PCR。

规格及成分成分编号十孔盒包装（去纸托）

2×qPCR MagicMix 90408 0.5 mL（棕色）

荧光 PCR 专用模板稀释液 180701 1 mL（黄盖）

大豆源性成分 PCR 引物混合液 14-502yw 100 uL（白盖）

大豆源性成分 PCR 阳性对照 14-502pc 50 uL（黄盖）

天净沙 DNA 释放剂试用装 130982 50 次（成分见下）

免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一 130982a 50 uL（白盖）

免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二 130982 100uL（绿盖）

免 DNA 提取试剂溶液 B 130982c 400 uL（红盖）

使用手册 13-510sc 1 份

运输及保存低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较

高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。

自备试剂 DNA 模板

使用方法一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标

准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本

试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样

品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分

震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，

充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，

充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对

照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的天净沙 DNA 释放

剂试用装。则按下面步骤操作：

9. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料

管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合

均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一

次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待

测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。

10. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小）或 5uL 液

体样品待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对

照中加入 5uL 水。

11. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样

品则震荡混匀。

12. 95℃保温 10 分钟。

13. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA

释放液足够进行 50-100 次 PCR。

三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）

14. 如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个

样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线样品（也充当 PCR 阳性对照）。

如果做 2-3 次重复，则反应设置数量相应增加 2 或 3 倍。

15. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕

后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：

成分

样品管

N+2 个

PCR 阴性

对照管

标准曲线

样品管（2-7 管）

2×qPCR MagicMix

（棕色管）

各 10 μL 10 μL 各 10 μL

大豆源性成分 PCR 引物

混合液（白盖）

各 2 μL 2 μL 各 2 μL

自备 10×ROX (见注) 各 2 μL 2 μL 各 2 μL

待测样品 DNA 模板 各 6 μL 不加 不加

第 7 步所得标准曲线样

品稀释液（2-7 号）

不加不加

各 6μL（2 号样到

2 号管，3 号样到 3

号管…）

注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪

器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene

3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，则用水替代。

16. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 qPCR（具体 PCR 参数可以根据 qPCR 仪器的

不同而自行优化）。

四、qPCR 反应参数

过程温度时间

预变性 94℃ 5 min

PCR 反应

（35 个循环）

94℃ 0.5 min

60℃

0.5 min（采集 SYBR 通道的

荧光信号）

72℃ 0.5 min

最后延伸 72℃ 7 min

五、数据处理

17. 以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品

的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。

六、电泳检测

18. 如果有必要电泳确认，可取 10-20 uL PCR 产物直接在琼脂糖凝胶上电泳产物的

大小为 216bp。开盖电泳验证容易污染实验环境，强烈不建议采用此方法。

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