产品及特点 沙门氏菌（Salmonella）引起的中毒病例在世界各地的食物中毒病例中所
占数量比例非常高。在我国，70-80%细菌性食物中毒事件是由沙门氏菌引起的，
沙门氏菌的检测已成为食品质量安全监控的必检卫生指标。本试剂盒就是针对沙
门氏菌肠毒素 stn 基因设计特异性引物，利用实时荧光定量 PCR 技术开发的沙
门氏菌检测试剂盒，它通过荧光染料实时显示样品模板 DNA 的量，并通过坐标
曲线表示出来，结果直观准确。它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
2. 荧光定量 PCR 检测，反应特异性强。
3. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
规格及成分 成分 编号 50 次塑料袋包装
2×qPCR Mix 90408 1.0 mL
stn 专一性引物对 yw13891390 100 μL
stn 阳性对照
（1.5×10E9 拷贝/μL）
yw13911392 10 μL
超纯水 100935 1 mL
使用手册 1 份
运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂 样品等
使用方法 一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的
关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检
测灵敏度。
二、制备 stn 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓
度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本
试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供
活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳
性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到
10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7
拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震
荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5
拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6
个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个
样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，
并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
三、PCR 检测（20 μL 体系）
1. 在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）：
成分 样品 阴性对照 阳性对照
2×qPCR Mix 10 μL 10 μL 10 μL
待测样品 DNA 模板 1-5 μL 无 无
stn 阳性对照 无 无
5 uL（每个
管加一个
稀释度的
对照）
自备 10×ROX (见注) 2 μL 2 μL 2 μL
stn 专一性引物对 2 μL 2 μL 2 μL
补水到 20 μL
注:仅 ABI7500、7700 和 7900
仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR
仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、
RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
2. 建议 PCR 反应参数（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）
过程 温度 时间
预变性 93℃ 5 min
PCR 反应
（40 个循环）
93℃ 35 s
55℃ 45 s
3. 数据采集
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合
DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm，
最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
以 stn 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再
以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出
样品 DNA 的浓度。
关联产品 鹦鹉热衣原体荧光定量 PCR 检测试剂盒（CAT#:11-3780）
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