使用说明书

细胞名称 H9 Feeder Free 人胚胎干细胞H9 无饲养层

货号 0692

种属 人

组织来源 人胚胎内细胞团

形态 球形克隆

生长方式 贴壁

安全性 所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护

培养 完全培养液： mTeSR1 人ES/iPS 细胞无饲养层完全培养试剂盒（Stem cell, 货号

85850）

传代消化液：温和分离细胞试剂（Stem cell, 货号07174）

冻存液：无血清无动物成分细胞冻存液（Stem cell, 货号07930）

基质胶：hES 专用基质胶（BD，货号354277）

温度：37℃

温度：37℃ 气相：95%空气，5%二氧化碳

传代 收到细胞后，请对细胞培养瓶外表进行消毒，将细胞置于培养箱中进行 1-2 小时的缓

冲，待细胞恢复基本生长状态后，进行后续细胞实验。

在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：人胚胎干细胞H9无饲养层培养方法

（一）细胞未长至 85%时，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内，严格无

菌操作，打开细胞培养瓶，若培养瓶上无特殊标注，吸去剩余培养液，只留 6-8ml培

养液继续培养。

（二）细胞已长满（达 85-95%）。即可进行传代，具体步骤如下：

1.弃去培养液，用 PBS 洗涤 1-2 次，

2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，显微镜下观察细胞消化情况，若细胞回缩变圆、

透亮、轻拍甁壁呈流沙样脱落，则迅速拿回操作台，加入双倍的含 10%血清的完全培

养液，终止消化并轻轻吹打细胞，使其变成单细胞悬液，

3.将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min，弃上清，轻弹管底，将细胞弹散，

4.加入新鲜培养液重悬细胞，进行传代、冻存，

5.如果没有特别说明，建议收到细胞后的第一次传代比例为 1:2。

注：1.观察细胞密度用（4X物镜）低倍镜观察，以便正确的判断细胞密度；观

察细胞形态请用（10X 或 20X）高倍镜观察；

2.瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养；

3.有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心重悬后接种到新瓶内；

4.收到细胞后，若发现培养瓶破损、漏液及细胞污染，请及时与我们联系。

保存 冻存条件：70%基础培养液+20%胎牛血清+10%DMSO

保存条件：液氮存储

供应限制 仅供研究之用

常见问题 1.培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师

解决方案 解决。

人胚胎干细胞H9无饲养层培养方法

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