取自F344大鼠骨髓，用F344大鼠间质干细胞完全培养基(货号：RAFMX-90011)贴壁培养，传代扩增至第二代冻存，每支含细胞1×106个。
细胞特性：经测试，本产品具有良好的增殖和分化潜能，可分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。质量控制：本产品经过了细菌、真菌、支原体检测。运输保存：采用干冰保存运输。收到细胞时，若干冰已经完全融化，请立即将细胞复苏培养；若尚留有干冰，请立即将细胞放入液氮中保存待用，请按指定条件贮存细胞，切不可将细胞置于高温环境。产品承诺：F344大鼠间质干细胞的体外培养周期有限。建议使用本公司配套的培养基和正确的培养方法来解冻、传代，以此保证细胞具备良好的增殖和分化能力。用途：本产品只提供给进一步的科研使用，不可应用于治疗等其他方面。产品介绍
骨髓间充质干细胞是一种能分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞的多能干细胞。
因其具有强大的增殖能力和免疫调节功能，故被广泛应用于组织工程，细胞治疗和基
因治疗。
OriCell F344大鼠骨髓间质干细胞取自F344大鼠的骨髓，拥有强大的自我更新能
力并具有多向分化潜能。
质量控制：
本产品经过了细菌/真菌、支原体、内毒素检测。
本产品还经过细胞复苏活力检测，细胞周期检测，分化潜能鉴定。
该产品仅提供给进一步科研使用，不可应用于临床治疗等其他方面。 产品特性
操作规范的条件下，本产品有良好的传代能力，至少能传5代。
本产品有良好的分化潜能，能分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。
流式检测鉴定，CD29、CD44、CD90（>70%），CD34、CD45、CD11b阴性
（<5%）。
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产品应用领域
目前， F344大鼠骨髓间质干细胞作为一个研究热点被广泛应用于再生医学和组
织工程（特别是在骨、心血管和神经系统等疾病的领域）。
OriCell F344大鼠骨髓间质干细胞可作为细胞模型被应用于增殖、移植和分化研
究，以及体内外的免疫反应的鉴定。 处理原则
1. 要在无菌的条件下处理该产品。
2. F344大鼠骨髓间质干细胞一旦培养起来，请冻存一部分细胞作为备份。
注意： F344大鼠骨髓间质干细胞能被冻存或复苏至少一次。
3. 我们强烈建议用于科研的细胞代次不超过10代。
4. 我们建议一般细胞接种密度是（2.5~4.0）×10
4个活细胞/cm2，具体数量请根据细
胞状态加以调整。
注意：我们强烈建议使用OriCell培养基和其他相关试剂以达到最理想的培养效果。
OriCell F344 大鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养
所需试剂
OriCell F344大鼠骨髓间质干细胞完全培养基（货号：RAFMX-90011）
F344大鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养
1. 水浴锅37°C预热。
2. 准备好 F344大鼠骨髓间质干细胞完全培养基，温浴到37°C。
3. 取15 mL离心管中加入9 mL完全培养基。
4. 从液氮中取出冻存的骨髓间质干细胞，立即放入-80°C冰箱（目的是让进入冻存管
的液氮挥发）。
5. 在-80°C放置2~3 min后，取出冻存细胞，将冻存管迅速放入37°C温水中，快速晃
动使管中内含物尽快融化。仔细观察，待冻存管内含物完全融化后取出。
注意：
1 尽可能避免水没过管帽，以减少污染的风险。
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2 要快速完成细胞复苏过程，融化过程时间过长，会造成复苏后的细胞活性较差。
6. 用70%~75%的酒精擦拭消毒冻存管口的外表面。
7. 在超净台中打开冻存管，用吸管将细胞冻存悬液转移至装有9 mL完全培养基的15
mL离心管中。注意避免产生气泡。
8. 为了减少细胞损失，再往冻存管中加入1 mL完全培养基，稍微吹打，收集至离心
管中。
9. 将细胞悬液经250 ×g（对应于Eppendorf 5810R离心机是1134 rpm）离心5 min。 10. 离心后尽量去除上清液，加入1~2 mL的完全培养基（已预热到37°C），轻轻吹打
混匀细胞沉淀。
11. 将细胞全部接种到1个T25培养瓶或底面积相当的培养器皿中，加入足量的完全培
养基。轻轻摇晃细胞培养器皿使细胞均匀分布。
12. 在37°C、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。
13. 复苏后的第2天，给复苏的细胞换用新鲜的完全培养基（已预热到37°C）。
14. 之后，每2天给细胞换新鲜的完全培养基直到细胞达80%~90%的汇合度。
15. 当细胞达80%~90%的汇合度，进行消化传代。
注意：为避免反复温热培养基，如果在一次操作中无法用完整瓶培养基，建议分装到
适当的无菌容器中。换液时只取当天所需用量的培养基进行预热。
图 1 已贴壁的 F344 大鼠骨髓间质干细胞
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OriCell F344 大鼠骨髓间质干细胞的传代
所需材料
0.25%Trypsin-0.04%EDTA（货号： TEDTA-10001）
Phosphate-BufferedSaline (1×PBS) （货号： PBS-10001）
OriCell F344大鼠骨髓间质干细胞（货号：RAFMX-01001）
OriCell F344大鼠骨髓间质干细胞完全培养基（货号：RAFMX-90011）
传代
1. 将 F344大鼠骨髓间质干细胞完全培养基、1×PBS、0.25%Trysin-0.04%EDTA预热
至37°C。
2. 吸去培养基。
3. 用1×PBS（T25培养瓶加入约3 mL，T75培养瓶加入约6 mL）洗涤细胞2~3次，注
意不要损害贴壁的细胞。
4. 吸去1×PBS。
5. 加入0.25%Trypsin-0.04%EDTA (T25培养瓶加入约1 mL，T75培养瓶加入约2~3
mL)。轻轻旋转，使Trysin-EDTA覆盖细胞表面，消化，显微镜下观察约70%-80%
左右的细胞变圆后，用手轻拍培养器皿的壁使细胞脱壁。
注意：由于不同实验室所使用的Trysin效价不同，消化时间可能会略有不同，具体时间应
以显微镜下观察到的情况为准。
6. 当看到明显的细胞脱落下来，立即加入预热的培养基（T25培养瓶加入约3 mL，
T75培养瓶加入约6 mL）终止消化。
7. 用吸管吸取液体，反复吹打培养器皿底壁，使细胞彻底脱离器皿底壁。吹打时动
作不宜太剧烈，尽量避免产生气泡。
8. 将细胞悬液转移到15 mL的离心管中。用1xPBS清洗底壁，收集洗液至离心管中。
9. 250 ×g，离心5 min。
10. 小心弃去上清液，加入2 mL完全培养基重悬细胞。吹打时动作不宜太剧烈，尽量
避免产生气泡。
11. 对细胞进行台盼蓝染色计数活细胞数量。
12. 按照（2.5~4.0）×10
4个活细胞/cm2的密度来接种细胞。
13. 加入适量的完全培养基，轻轻摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布。
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14. 把细胞放入37°C，5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养。
提示
1. 换液时机
传代后发现有很多死细胞，应该予以换液。
当完全培养基 pH 值变低（培养基的颜色变黄），而此时细胞仍未能做传代处理时，
应该予以换液。一般来说， F344 大鼠骨髓间质干细胞的换液间隔为 2~3 天。
2. 传代时机
当 F344 大鼠骨髓间质干细胞达到 80%~90%汇合时，就应该进行传代。不可让
F344 大鼠骨髓间质干细胞完全融合或过度融合，否则会发生生长接触抑制。这将严
重影响细胞的生长状态。
P3-40× P3-100×
图2 已贴壁的 F344大鼠骨髓间质干细胞（P3）
3. 细胞汇合度提示（以C57 MSCs为例）
图3 细胞约70%~75%汇合 图4 细胞约85%~90%汇合
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OriCell F344 大鼠骨髓间质干细胞的冻存
所需材料
• OriCell间质干细胞无蛋白非程序冻存液（货号：GUXMX-07021）
冻存
注意：冻存前24小时需要给细胞换上新鲜的完全培养基。
1. 待细胞生长至可传代的密度，即可消化准备冻存。
2. 细胞的消化请参考OriCell F344大鼠骨髓间质干细胞的传代操作中1~8步骤。
3. 对细胞进行计数。
4. 细胞悬液经250 ×g离心5 min。
5. 小心弃掉上清。
6. 用OriCell间质干细胞无蛋白非程序冻存液重悬细胞，并使细胞的密度为1×10
6个活
细胞/mL（或希望达到的细胞密度）。
注意：OriCell间质干细胞无蛋白非程序冻存液在使用前需保持4°C。
7. 把细胞分装到冻存管（需提前做好标记或贴上标签）中，旋紧冻存管盖。
8. 将冻存管直接放进-80°C冰箱。24小时后将细胞转移到液氮进行长期保存。
注意：如使用程序冻存液，需将冻存管放入程序降温盒后方可放入-80°C 冰箱。
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