本文采用超声提取，在酸性介质中甜蜜素与亚硝酸钠反应进行衍生化，通过气相色谱质谱联用法对食品中甜蜜素进行定性和定量分析，甜蜜素方法主要参照国家标准GB/T5009.97-2003^[3]，相应的检测方法还有高效液相色谱法^[4]和液质联用等方法^[5]等。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

江苏天瑞仪器股份有限公司气相色谱质谱联用仪：GCMS6800

甜蜜素标准储备溶液：称取一定量的甜蜜素标准品（纯度为99.0％）于干燥容量瓶中，用水配成1000mｇ/kg标准储备溶液。

试剂均为优级纯，试验用水为二次蒸馏水。

1.2 仪器工作条件

1.2.1 气相色谱条件

DB-5毛细管色谱（30m×0.25mm,0.25um）；载气：氦气（纯度为99.999％），载气流量1.0mL/min；进样口温度250℃，进样量1.0uL，进样方式为分流进样,分流比10:1；程序升温：初始温度为40℃，保持时间10min，以25℃/min速率升至270℃，保持时间5min。

1.2.2 质谱条件

电子轰击离子源（EI），四级杆温度150℃，接口温度280℃；采集方式为选择离子监测扫描（SIM），溶剂延迟时间6min,选择3个监测离子质荷比（m/z）为55,81,83。

1.3 实验方法

1.3.1 样品前处理

将样品用高速粉碎机粉碎均质或用剪刀剪碎，称取5g（精确至0.01g）样品于50ml具塞离心管，加入20ml水，先涡旋振荡1min，然后水浴超声15min，最后摇床震荡10min,以6000r/min旋转离心10min,移取10mL上清液于50mL离心管中，冰浴待衍生化。

1.3.2 标准样品前处理

直接移取20mL超纯水于50mL离心管中，准确吸取一定浓度的甜蜜素标准溶液1mL，按照上述样品衍生步骤进行衍生化反应。以6000r/min旋转离心10min,移取10mL上清液于50mL离心管中，冰浴待衍生化。

1.3.3 衍生化和测定

在冰浴好的上清液中加入2.5mL的 100g/L硫酸溶液和2.5mL的50g/L亚硝酸钠溶液,混匀，冰浴30min,期间摇匀数次。加入正己烷5mL,氯化钠3g,涡旋震荡1min,6000r/min旋转离心10min,移取1.0mL上清液通过0.45um过滤膜后气相色谱-质谱条件下测定。

2结果与讨论

2.1 特征和离子的选择

甜蜜素的主要衍生物环己醇亚硝酸酯作为定性和定量，如图1。保留时间8.511min.定性离子（m/z）为55,81,83。定量离子为55。质谱图见图2.

图1、甜蜜素衍生物在总离子流色谱图

Figure 1, Cyclamate derivatives total ion chromatogram

图2、甜蜜素衍生物的质谱图

Figure 2, Cyclamate derivative spectrum

图3、甜蜜素衍生物在SIM扫描下的离子流色谱图

Figure 3,Cyclamate derivative SIM under scanning ion chromatogram

图4、甜蜜素衍生物在SIM扫描下的质谱图

Figure 4, Cyclamate derivative SIM under scanning spectrum

2.2 前处理条件选择

2.2.1 衍生时间选择

准确吸取的1ml甜蜜素储备液溶液按照上述衍生步骤进行衍生化，甜蜜素衍生物浓度为200ug/mL，衍生反应时间分别设置为10min、20min、30min、40min、50min，考察反应时间对反应的影响。结果表明，随着时间从10min升至30min，衍生物信号响应值逐渐增加，随着反应时间的延长，响应值反而出现降低，因此，衍生反应温度30min最佳。

2.2.2 硫酸浓度的选择

准确吸取的1mL甜蜜素储备液溶液按照上述衍生步骤进行衍生化，甜蜜素衍生物浓度为200ug/mL，冰浴反应条件下，加入50g/L的亚硝酸钠和分别为50g/L，75g/L，100g/L，125g/L，150g/L。结果表明，酸度从50g/L至100g/L，反应衍生物信号响应值明显增加，浓度升高时，响应值出现减少，因此，最终衍生反应酸度为100g/L。

2.2.3 亚硝酸钠浓度对衍生反应的影响

准确吸取的1ml甜蜜素储备液溶液按照上述衍生步骤进行衍生化衍生化，甜蜜素衍生物浓度为200ug/mL，冰浴反应条件下，加入100g/L的硫酸，和分别为30g/L，50g/L，70g/L，90g/L亚硝酸钠。结果表明，酸度从30g/L至50g/L，反应衍生物信号响应值明显增加，浓度升高时，响应值出现减少，因此，最终亚硝酸钠衍生反应为50g/L。

3实验数据

3.1 精密度和重复性实验

准确移取储备液500uL于离心管中，用水定容20mL按照上述标样衍生步骤进行衍生化，衍生物浓度为100ug/mL，平行制备反应液6次，用GC-MS测定。考察衍生方法的重现性以及组分保留时间和峰面积的相对标准偏差，6个平行样的谱。结果表明，保留时间RSD为0.98%，峰面积RSD为6.00%,，具体实验数据如下表1所示 。

表1、重复性测试结果

Table 1, repeatable test results

3.2 线性关系和检测限

准确吸取浓度为10ug/mL的甜蜜素标准溶液10ul于50ml离心管中对应衍生物浓度分别为2ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、100ug/mL、200ug/mL，按照上述标样衍生化步骤进行衍生化，进行线性测试。实验所得线性方程为：y=940.43x-3525.57，线性相关系数为0.9984，如图5所示。以3倍信噪比计算，最低检测限为0.8mg/kg该方法的最低检测限远低于国标中的限量要求。我国《食品添加剂使用标准》明确规定，在糕点、面包、饮料、雪糕、酱菜、调料、配制酒等中甜蜜素的最大使用量为0.65g/kg；在凉果，话梅等中甜蜜素的最大使用量为8.0g/kg。

图5. 线性关系图

Figure 5，Linear

3.3 回收率测试

选择2mg/kg、50mg/kg、200mg/kg的标样添加浓度，对某品牌橙汁进行回收率实验，每个浓度分别做三次平行样，按处理样品的方法处理加标后的样品并测试，采用外标法定量，测试结果如下表2所示。

表2、回收率测试结果

Table 2, the recovery test results

3.4 实际样品测试

按照上述样品处理方法对酱油，橙汁，杏仁，杏仁壳样品进行前处理和衍生化，使用GC-MS6800进行测试，测试结果如下表3所示：

注：“N.D”表示“未检出”

表3.、食品中甜蜜素含量测试结果

Table 3., cyclamate in food content of the test results

4结论

食品中的甜蜜素经过亚硝酸钠重氮化反应，生成的衍生物通过GCMS进行测定分析，该方法重现性好，保留时间RSD为0.98%，峰面积RSD为6.00%。同时具有良好的线性范围，线性相关系数为0.9984，方法最低检测限为0.8mg/kg。

三种标样添加浓度的回收率在105.7%-113.3%之间，结果偏高，原因可能为标样当中的衍生物浓度较高分解为环己醇比较多，导致标样浓度降低，回收率也偏高。

本实验采用GCMS-6800，在SIM扫描模式下对食品中的甜蜜素进行测试和分析，方法稳定可靠，线性范围好，灵敏度高，受杂质峰的干扰小，能够有效地对食品中的甜蜜素进行定性定量分析。

江苏天瑞仪器股份有限公司是专业生产ROHS检测仪，气相色谱质谱联用仪,镀层测厚仪，电感耦合等离子体发射光谱仪,ROHS分析仪，X射线镀层测厚仪，气相色谱仪，ROHS测量仪，液相色谱仪，ROHS2.0分析仪，XRF合金分析仪，X荧光光谱仪，汽油中硅含量检测仪， ROHS检测仪器，手持式合金分析仪等，涉及的仪器设备主要有EDX1800B,Thick800A，Thick8000，ICP2060T,GC-MS6800，ICP-MS2000等。

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