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了解细胞基本特性

提供者:上海谷研实业有限公司   发布时间:2018/4/12 9:54:09  阅读次数:4213次  进入该公司店铺

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收到细胞的注意事项

一般从细胞库购买的细胞通常保存在冻存管中用干冰运输,或是在培养瓶中常温运输。在收到冻存细胞后,很重要的一点是迅速解冻使其立即复苏并除去DMSO,然后将它们放置到培养基中。如果做不到上面这点,需将细胞存储在液氮中(-130℃以下)。不要将冻存细胞储存在高于-130℃的温度下,这会使细胞存活率迅速下降。

了解细胞特性

在细胞培养之前,我们要了解一下你所要养细胞的基本特性,这点可以从细胞的产品说明书或者从ATCC细胞库查询。除此之外我们还要知道每管细胞的数量,建议分裂或传代的比例,和已知细胞的传代代次等信息。

准备培养基

复苏细胞时需要准备合适的培养基,血清和细胞生长所需的添加剂。大部分培养细胞所用的培养体系,可以在订购细胞系时获得。

虽然大多数细胞系可以在不止一种培养基中生长,但是当培养基改变时,细胞的性质也会变化。因此,使用细胞库推荐的培养基来培养细胞会获得最好的效果。

开启冻存管

1.准备一个培养瓶,加入适宜细胞培养的培养基,液体体积按照说明书的推荐配置,并平衡培养基的温度和pH(CO2)。

2.在37℃水浴中或细胞的正常生长温度下将冻存管轻轻摇动。解冻要快,约2分钟或直到冰晶融化即可。

3.从水浴中取出冻存管并用浸泡或喷洒70%乙醇的方式来消毒。进一步的操作均需在无菌操作台中严格无菌条件下进行。

4.拧开冻存管的管帽并将内容物转移到一个含有9 ml推荐培养基的无菌离心管中。通过温和离心(125×g 10 min)除去冷冻保护剂(DMSO)。弃去上清,并用1或2 ml完全培养基重悬细胞。将这些细胞悬液转移到含有完全培养基的培养瓶中并轻轻摇动以彻底混匀。

5.培养24小时后检查细胞状态并在需要时进行传代。

注:某些细胞系,如杂交瘤细胞,需要几天的时间才能从冻存状态完全复苏。某些杂交瘤细胞在培养的第一天活力较差,并会产生细胞碎片。在此之后,细胞就会开始复苏,并进入指数增长。

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