Column:Sepax AAA, 4.6×250 mm

Mobile phase:A: ACN : 0.1 M NaAc = 7 : 93 (v/v), pH=6.5; B: ACN : H2O = 80 : 20 (v/v)

Time (min): B (%):0 15 18 25 30 30.01 450 15 24 40 40 100 100

Flow rate:1.0 mL/min

Temperature:36 oC

Detection:UV 254nm

Injection Volume:5 µL

Sample:18 Amino acids

1.Asp2.Glu3.Ser4.Gly5.His6.Arg7.Thr8.Ala9.Pro10.Tyr11.Val12.Met13.Cys14.Ile15.Leu16.Phe17.Trp18.Lys

氨基酸专用柱特点

1.氨基酸专用柱固定相以高纯硅胶为基质，采用高纯度键合试剂，通过创新独有的技术确保最大单分子层覆盖和全封尾。

2.高度可控的单分子层形成和封尾技术保证了可靠的柱间重现性。

3.填料表面覆盖最大化，因此具有优异的稳定性。

4.填料为均一的球形颗粒，孔径为120Å。通过运用独有的填装技术装填得到的色谱柱柱床密度均一稳定，可保证具有最高的柱效。

氨基酸专用柱订购信息

如果需要购买 搜索成都摩尔科学仪器有限公司 www.cdmole.com 或者拨打 0-2-8-8-5-1-1-5-0-9-2

Sepax AAA (氨基酸分析) 色谱柱手册色谱柱信息

Sepax AAA (氨基酸分析) 色谱柱专为分离与分析游离氨 基酸而设计。该柱以硅胶基质反相固定相材料为填料。Sepax AAA 固定相以高纯度具有良好机械稳定性的硅胶为基质，采 用高纯度键合试剂，通过创新独有的技术确保最大单分子层 覆盖和全封尾。 高度可控的单分子层形成和封尾技术保证了 可靠的柱间重现性。Sepax AAA表面覆盖率已达到最大化， 因此具有优异的稳定性。该填料为均一的球形颗粒，孔径为 120 Å，比表面积为 300 m2 /g。 通过运用独有的匀浆填装技术装填得到的Sepax AAA柱柱床密度均一稳定，因此可保证具 有最高的柱效。通过PITC 衍生化方法，18种氨基酸可在Sepax AAA 柱获得高分辨率的快速分析。

色谱柱的安装和操作

色谱柱在运输过程中或在没有使用时，它的两端总是用 堵头进行密封。当将色谱柱接入色谱仪器系统时，首先移去 两端的堵头。请注意将流动相流动的方向与柱上标记的方向 保持一致。除非出于特殊考虑，例如为了清除堵在色谱柱入 口端的脏污等而需要将色谱柱反接以进行冲洗时，建议用户 在接上色谱柱时一定要遵循柱上标记的方向。由于色谱柱的 连接是整个色谱操作过程的一部分，如果密封卡套过紧，或 安装不合适，或者密封卡套与色谱柱端口不匹配，都有可能 导致溶液的泄漏。请按照下面步骤将色 ，从而将色谱柱接入 HPLC 系统： (a) 第一次使用的管线，请依次将管线接头和密封卡套装在 径 1/16"的管线上。密封卡套的宽口端应朝向管线接头。 (b) 将管线紧紧插入色谱柱的接口，向前滑动密封卡套和管 线接头，并使管线接头的 ，然后拧紧管线接头。 (c) 在用力将管线压入 螺帽再进一步紧固。 ) 对色谱柱的另一端采用上述方法进行操作。 新的 Sepax AAA 柱是置于甲醇（或乙腈）水溶液中运输 的，在储存和运输过程中，硅胶填料可能会干涸。这时推荐 用 10-20 倍柱体积的纯有机溶剂如甲醇、乙腈进行冲洗以活化色谱柱。接着可用用户自己选择的流动相冲洗色谱柱。流 速由 0.1mL/min 逐渐升至所需的操作条件，直至基线稳定为 止。如果柱压和基线波动较大，这可能是气泡进入了色谱柱中这时可用较高流速冲洗色谱柱 2-5 分钟，例如对于 4.6x250 mm 的色谱柱可采用流速 1.5mL/min。

样品和流动相

为了避免色谱柱的堵塞，所有样品和溶剂，包括缓冲溶 液在内，都必须在使用前用 0.45 μm 或 0.2 μm 的滤膜过滤。 Sepax AAA 键合固定相的性质为非极性，推荐流动相为有机 试剂与水的混合物（如甲醇或乙腈的水溶液等）。流动相在 使用前需要脱气。一个简单的脱气方法是将流动相在水泵形成的真空下超声 5 min。当 Sepax AAA 柱用于梯度洗脱 时，起始流动相通常为 5%甲醇（或乙腈）。

色谱柱的保护

pH 避免在 pH 低于 2 或高于 11 的条件下使用 Sepax AAA 柱。较高的 pH 会溶解硅胶，从而使部分或全部的烷基 链从硅胶表面脱落，引起分离效率的 。为了获得最佳的分离效果和延长柱的使用寿命，请尽量 使用 pH 在 3 - 7.5 范围内的流动相。

压力 尽管 Sepax AAA 柱可在高至 5000psi 的压力下使 用，但正常的操作压力应当低于 3000psi。长时间在高压下运 行会损坏色谱柱和输液泵。由于压力来源于流速，因此最大 流速将受制于系统所能承受的压力。一般而言，柱压会随着 色谱柱使用时间的增加而逐渐增加。压力突然增加预示色谱柱入口端的筛板发生了堵塞。在这种情况下，建议将色谱柱 反接后用适宜的溶剂进行冲洗。

温度

最高操作温度为 60o C。长时间在高温(>75o C)下操作 也会损坏色谱柱，这种情形在高的pH (>8)条件下特别突出。

储藏 长期不用时，请不要让水或缓冲液存留在色谱柱 中。在替代缓冲液时，请用至少 20-30 倍柱体积的 50%甲醇 （或乙腈）水溶液冲洗色谱柱，再用 20-30 倍柱体积的纯有机溶剂如已睛进行冲洗。。每根色谱柱在运输过程中均会附有 两个可拆卸的堵头。为了防止柱床干涸，请用堵头塞紧色谱柱的两端。

Sepax’s AAA 反 过 色谱柱氨基酸分析步骤

1. 原理 这种分析氨基酸的方法基于柱前衍生步骤，衍生化反应 是在碱性条件下完成的，采用异硫氰酸苯酯和游离氨基酸 应生成的 PTC-氨基酸衍生物可于 UV 254 nm 处被检测到。通 PITC 衍生法改善的氨基酸分离同样使其分析更有效。

3. 衍生化反应转移 200 μL 18 种氨基酸标准溶液（或样品溶液）入 1.5mL 塑料管中, 加入 100 μL 三乙胺溶液和 100 μL 异硫氰酸苯酯溶液，混合，至于室温下反应 1h 后，加入 400 μL 正己烷涡旋振荡 10 min，取下相用 0.45 μm 滤膜过滤后进样。4.液相色谱分析

流速： 1.0 mL/min 温度： 36 o C 检测： UV 254 nm 进样量： 5 µL

色谱柱订购信息

成都摩尔科学仪器有限公司提供的产品系列包括：各类食品检测和药品检测涉及的从分析到制备等规格齐全、填料齐全的液相色谱柱、气相色谱柱、 纯化填料、品种规格齐全样品前处理固相萃取柱和免疫亲和柱；检测的色谱柱以及纯化用的系统成套设备和各种填料；同时，成都摩尔科学仪器有限公司也是各品牌色谱柱、仪器的配件耗材(如氘灯、石墨管、单向阀等）、常规实验室消耗品(如针头过滤器(含灭菌器)、过滤膜(含除菌膜）、样品瓶(含顶空瓶）及相关盖垫、 移液器、标准品(食品和环境等）和各种分析检测仪器(如液相色谱仪、气相色谱仪、培养箱、生物安全柜、天平、pH计等综合集成供应商。