提供者：上海喆图科学仪器有限公司 发布时间：2017/12/14 9:27:39 阅读次数：4253次 进入该公司店铺
液体培养基：CaCl20.1g，KH2PO40.5g，NaCl0.2g，H2O1000mL，微量元素(FeSO4·7H2O3.82g，CoCl2·6H2O0.25g，H3BO36mg，CuSO4·5H2O2.9mg等)1mL。所有培养基均在121℃下灭菌30min。
孢子悬浊液：在驯化好且长有丰富的白色分生孢子的蛋白胨琼脂培养基中刮取部分孢子置于无机盐固体培养基(含100mg·L-1TCP)上，30℃恒温培养。7d后转接于150mg·L-1TCP的无机盐固体培养基驯化3次，待菌体大量长出后于无菌条件下刮取孢子至无菌蒸馏水中，振荡分散成乳白色的孢子悬液，光密度约为0.1(OD400)，孢子个数为3.1×106个·mL-1。
2.2试剂与仪器
试剂：氨水，乙醇(纯度>90%)，浓盐酸，稀盐酸，三氯酚(TCP)(化学纯)，4-氨基安替比林，铁，NaCl，缓冲溶液。
主要仪器：Agilent1200系列液相色谱仪，电子天平(METTLERTOLEDO);UV2450PC紫外可见分光光度计;电热恒温鼓风干燥箱;微电脑控制生化培养箱;恒温振荡器;单人水平垂直两用净化工作台高压蒸汽灭菌器;高速冷冻离心机。
2.3 TCP的降解条件
取0.05g过滤出的菌体(湿重)的菌体孢子悬浊液(600nm处吸光度为0.16～0.165)，加入50mL液体培养基浓度一定的TCP溶液中，在一定温度、pH、150r·min-1下继续培养，每间隔24h测定TCP浓度，分别研究温度、pH、外加碳源、氮源、氯离子及TCP初始浓度对其降解效率的影响。温度影响实验条件为pH7.0，TCP初始浓度为30mg·L-1，温度25℃、30℃和35℃。pH影响实验条件为30℃，TCP初始浓度为30mg·L-1，pH为2.0~8.0。外加碳源影响实验条件为30℃、pH7.0，TCP初始浓度为30mg·L-1，葡萄糖(1g·L-1.3g·L-1.5g·L-1)。氮源影响实验条件为30℃、pH7.0，TCP初始浓度为30mg·L-1，氮源物质为NH4Cl、NaNO2、蛋白胨、NH4NO3和NaNO3(浓度均为0.2g·L-1)。氯离子影响实验条件为30℃、pH7.0，TCP初始浓度为30mg·L-1，NaCl浓度为0~0.6g·L-1。TCP浓度影响实验条件为30℃、pH7.0，TCP初始浓度为10~50mg·L-1。平行试验3次，取其平均值。
2.4动力学分析
根据微生物对底物降解速率与底物浓度的关系，可将这种反应分为不同的级数方程。当底物降解速率不受反应物浓度影响时，为零级方程。在温度不变的情况下，零级方程的降解速率是常数。本文拟用零级降解动力学方程对实验数据进行拟合。
2.5降解产物分析
取不同的降解时间的5mL培养液于5000r·min-1，4℃离心10min后，取上清液作为测定样，以酸化样为空白对照，碱化样做测定样，于190~600nm范围内进行紫外扫描，以分析上清液溶质组分差异。
取不同的降解时间的10mL培养液于10000r·min-1，4℃离心10min，过滤上层清液。再用等体积的乙酸乙酯萃取其中的有机物质，氮吹浓缩至1mL，直接进GC-MS分析，氦气流速为0.8mL·min-1。柱温为50℃，保留5min，再以20℃·min-1程序升温至280℃，保留10min。进样口和检测器温度分别为250℃和300℃。
关键词：生化培养箱 鼓风干燥箱 恒温振荡器
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