可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
产品内容:
提取液:液体50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体4mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体13mL×1 瓶,4℃保存;
品:粉剂×1 支,4℃保存,含10mg 无水葡萄糖(干燥失重<0.2%),临用前加入1ml 蒸馏水溶解,配制成10mg/ml 葡萄糖溶液备用,4℃可保存1 周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。
品准备:将品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mg/ml。
操作步骤:
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一、样品测定的准备:
1、细菌或细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500 万细菌或细胞加入1mL
提取液,超声冰浴破碎细菌或细胞(功率20%,超声3S 秒,间隔10S,重复30 次);8000g 4℃离
心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:称取约0.1g 组织加入1mL 提取液,冰浴中匀浆。8000g ,4℃离心10min,取上清,置冰
上待测。
二、加样表和测定步骤:
试剂名称(μL) 对照管 测定管 管
试剂一 50 50 -
试剂二 200 200 -
双蒸水 50 50 -
样本 50 -
煮沸的样本 50 -
混匀,40℃准确水浴30min,取出后立即放入沸水中煮沸15min,得糖化液
糖化液 50 50 -
液 - - 50
试剂三 150 150 150
混匀, 沸水浴中煮沸显色15min,冷却
双蒸水 1050 1050 1050
混匀,540nm 处蒸馏水调零,测定吸光值A,样品管计算ΔA=A 测定管-A 对照管。曲线的建立:540nm 处蒸馏水调零,读管吸光值A。以浓度(y)为纵坐标,吸光度A(x)为横坐标建立曲线。
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