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ELISA试剂盒为您详解酶结合物的稀释液及方法:
A、正确稀释酶结合物
a)酶结合物的合适工作浓度需要通过预实验来确定,浓度过高易导致本底偏高,浓度过低则会导致阳性信号的减弱。
b)酶结合物最好在使用前稀释,稀释后的酶结合物不宜长期保存,因为低浓度的酶结合物极易失活。
B、酶结合物的稀释液
a)在稀释液中常加入高浓度的无关蛋白质(例如1%BSA或5%脱脂奶粉),通过竞争抑制酶结合物在固相载体上的非特异性吸附。
b)一般还加入能够抑制蛋白质吸附于塑料表面的非离子型表面活性剂,如吐温20(0.05%的浓度较为适宜)。
ELISA试剂盒检查成果的判断方法详解:
1、目测定性法:参加底物经酶解和停止反应后,肉眼调查阳性孔色彩显着深于阴性对照,与阴性对照的色彩挨近者,判定为阴性。
2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性成果的阈值。
3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。
4、定量测定成果依据规范曲线核算样品中待测物的含量。

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