1．配制洗涤液 l瓶浓缩洗涤液加475ml蒸馏水。配好的洗涤液短期内可置室温环境中，长期可存于2—8℃环境中。

2．配制酶联物 按1：101倍稀释，即取1u1浓缩酶联物加酶联物稀释液1 000ul(根据检测标本数量确定稀释量)，未用完的丢弃。
3．待试剂盒平衡至室温后，待测标本按1；51稀释，即取4tA血清与200u1标本稀释液混合。

4．将稀释标本置37℃环境中20min。

5. 各加100ul阳性、弱阳性、阴性对照及已稀释待测标本上清液于相应孔中，空白对照孔加100u1标本稀释液，盖好反应板，置37℃环境中30min。

6. 甩尽板中液体，每孔用200～300ul洗涤液洗5次，每次均需拍干。

7．每孔加酶联物100~1，盖好反应板，置37℃环境中30min。

8．甩尽板中液体，洗5次，每次拍干。

9. 加底物A、B各1滴或各50tzl，混匀，置37℃环境中15min。
10．取出，加终止液1滴，用酶标仪450nm测其OD值。若肉眼观察则不加终止液，直接判断结果。

注意事项：

1．本实验结果须结合临床表现、病史作出诊断后，方可采取适当临床处理。
2 . 试剂盒虽然含有消除干扰因子的物质，但仍可能有少量标本难以除尽干扰。因此，如某标本多项IgM均为阳性，应考虑RF的干扰。