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食品微生物快速检测技术研究进展

提供者：广州双螺旋基因技术有限公司发布时间：2017/4/27 10:38:09 阅读次数：3391次进入该公司店铺

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食物病原微生物是食品安全的重点监控项目，而对其的快速检测（验）一直是相关研究的热点。近年来，微生物的快速检测和自动化研究进展迅速，依靠培养基进行培养、分离及生化鉴定的传统方法费时费力。快速检测及其自动化则综合引用微生物学、化学、分子生物学、生物物理学、免疫学以及血清学试验技术对微生物进行分离、检测、鉴定和计数。和传统方法比较，更快、更方便、更灵敏。

一、“干片法”
“干片法”是利用无毒高分子材料做载体，将特定培养基和显色物质附着在上面，通过微生物在培养基上的生长特性和显色反应来测定食品中的微生物。这是一种快速、定性和定量检测试纸和胶片微生物检测方法，集成现代化学、高分子材料、微生物学于一体，已经达到常规定量的水平。“干片法”优点是准确度高，不需要配置试剂、操作简单快捷、易于保存和运输、价格低廉、减少对环境的污染，适用于实验室、生产场地和野外环境工作。
应用：菌落总数测试片，大肠菌群测试片，沙门氏菌测试片，金黄色葡萄球菌测试片、餐具大肠杆菌群检验纸片，水质大肠菌群检验纸片等。

二、胶体金法
胶体金免疫分析，以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的免疫标记技术，优点是特异性高，灵敏度较高，对于现场初筛有较好应用前景，其缺点是由于抗原抗体转移性，针对每种待测物都要建立专门的检测试剂和方法，为此方法的普及带来难度，成本相对较高，检测限也较高，所以目前为止在食品安全快速检测领域应用不多。

应用：金黄色葡萄球菌快速检测卡、沙门菌检测卡。

三、酶联免疫法（ELISA法）
酶联免疫法是一种固相酶方法，将抗体抗原反应的特异性和酶高效催化作用有机结合一起的检测技术，即可测定抗原，也可测定抗体，可定性和定量检测。

应用：沙门氏菌、大肠杆菌、军团菌等检测盒。

四、核酸方法
（一）聚合酶链式反应（PCR）技术
PCR技术自1985年问世以来，便以惊人的速度应用于生物科学的各个领域，根据待测DN段的两端序列，合成2个能够与DNA双链互补的引物，然后将过量的引物和4种脱氧核糖核酸（dNTP）、DNA聚合酶以及待测DN段混合成反应体系，经历高温变性、退火、延伸三个循环阶段，对DNA进行扩增。一般经过30次~50次扩增循环，可使目的DN段放大至数百万倍。PCR技术在食品微生物快速检测中应用广泛。

（二）环介导等温扩增技术
2000年由日本学者纳富公开的一种新的适用于基因诊断的恒温核酸扩增技术，LAMP法，即“Loop-mediated isothermal amplification”。该技术的优势是高特异性、高灵敏度、操作十分简单，对仪器设备要求低，结果的检测也很简单，不需要像PCR那样进行凝胶电泳。

（三）核酸探针法
核酸探针法又称为核酸分子杂交技术，原理是来源不同的2条核酸链如果有互补的碱基序列，就能特异性结合成分子杂交链；据此，根据已知序列的DNA或RN段加上可识别的标记（同位素标记、生物素标记等）使之成为探针，用来检测未知样品中是否具有相同的序列，该技术被应用到检测食品中的一些常见致病菌，如大肠杆菌、沙门食菌等。

（四）基因芯片法
基因芯片技术是通过原位合成或显微打印手段，将数以万计的DNA探针固化于支持物表面得到二维的DNA探针序列，与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号对生物样品的实现快速、并行、高效的检测或医学诊断。优点是有高度的并行性、多样化、微型化和自动化，缺点是价格昂贵，高通量微生物测定系统价格在100万以上，目前多为进口的高通量微生物测定系统；