夹心法ELISA检测人α2a,α2b干扰素(α2a,α2b)

　　一、原理：选用2种针对rHuIFN-α2a和rHuIFN-α2b分子不同表位的McAb，1种McAb作为包被抗体，另1种McAb标记辣根过氧化物酶(HRP)作为结合物，催化底物显色。根据标准品OD值绘制标准曲线，在标准曲线上查出待检标本的含量。

　　二、试剂盒提供试剂(供检测22份标本)

1. 包被抗体：应用时用0.05M,pH9..6碳酸盐缓冲液作100倍稀释。

2. 酶标抗体：应用时用0.1％BSA-PBS作200倍稀释(售出前已稀释10倍)。

3. 标准品：rHuIFN-α2a(3ng/ml)，用时用0.1％BSA-PBS作倍比稀释。

4. ABTS底物：ABTS 1mg＋0.1M,pH5.0柠檬酸缓冲液 2ml+3％ H２O２4μl(临用时配)。

　　三、自备试剂和材料

1. 进口96孔或国产40孔聚苯乙烯elisa板(敏感性以进口板稍好)。

2. 0.1M,pH7.4 PBS配其它液体用。

3. 包被缓冲液：0.05M,pH9.6 Na２CO３-NaHCO３缓冲液。

4. 洗涤液：0.05％Tween 20-PBS。

5. 结合物稀释液：0.1％BSA-PBS(用于稀释标本、标准品和结合物)。

6. 底物缓冲液：0.1M,pH5.0柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液。

7. ELISA读数仪等。

　　四、操作步骤

　向ELISA板中加入稀释好的包被抗体100μl/孔

↓ 4℃ 24～48h

　洗3次，加入10倍连续稀释的待测标本

(做4个稀释度即可)或倍比稀释的标准品(6个稀释度) 100μl/孔

↓37℃,1h

洗3次，加入稀释好的酶标抗体100μl/孔

↓37℃,45min

　洗4次，加入配好的ABTS底物液 100μl/孔

↓RT,30min

　测410nm OD

↓

　绘标准曲线

五、注意事项：

1. 待检标本必须无污染，无溶血。

2. 标本稀释后加入ELISA板时，注意从低浓度向高浓度依次加入。

3. 结合物稀释液和底物缓冲液中禁止加入叠氮钠。