一、原理：采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体，其中一株（4D7）作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的IL-8,另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。

二、试剂器材

1. 试剂盒提供包被抗体、酶标抗体、标准品，底物（ABTS）、96孔elisa板。

2. 包被缓冲液、PBS、底物缓冲液配制同常规ELISA法。

三、操作步骤：

1. 包被：pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板,100μl/孔，放4℃,36小时。

2. 封闭：0.1%吐温PBS（Buffer A）冲洗96孔板三次，加3%BSA Buffer A（Buffer B）200μl/孔，放37℃,1小时。

3. 加待检样品：Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100μl/孔，放37℃,3小时。

4. 加酶标抗体：Buffer A冲洗96孔板五次,3%PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100μl/孔，放37℃,1小时。

5. 显色：Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物（ABTS）,0.2mg/ml,加3%H2O2,2μl/ml，加入96孔板，100μ/孔，室温下或37℃显色。

四、注意事项：

1. 待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快（6小时以内）分离血清。

2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。