分光光度法 50管/24样
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其
水解产物是高等植物的氮源之一。S-ACPT在酸性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含
量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理：
酸性条件下，S-ACPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合
物生成钨蓝；在 680nm有特征吸收峰。
所需仪器及设备：
可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、蒸馏水
试剂组成和配置：
试剂一：液体 60mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃
保存；
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入100uL试剂七使粉剂润湿，然后加入20ml试剂一，转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用；用不完的试剂 4℃保存；
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入50ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃
保存；
试剂五：液体 10mL×1瓶，4℃保存；
试剂六：液体 1.5mL×1支，0.05mg/ml标准酪氨酸溶液，4℃保存；
试剂七：液体 1.5mL×1支，4℃保存；
样品处理：
新鲜土样自然风干或 37度烘箱风干，过 30~50目筛。
测定操作：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。
2、试剂二、三和四40℃水浴10min。
3、样本测定：
试剂名称 | 对照管 | 测定管 |
风干土样（g） | 0.02 | 0.02 |
试剂一（μL） | 100 | 300 |
试剂三（μL） | 200 | |
混匀，40℃水浴30min，振荡5-6次，使土样与反应液充分接触 |
试剂二（μL） | 100 | 100 | |
混匀，8000g 25℃离心 10min，取上清液 |
| 测定管 | 对照管 | 标准管 |
上清液（μL） | 150 | 150 | |
试剂六（μL） | | | 150 |
试剂四（μL） | 700 | 700 | 700 |
试剂五（μL） | 150 | 150 | 150 |
混匀，40℃水浴 20min，680nm 下读取各管吸光值 A
注意：标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
S-ACPT活性计算：
单位定义：每天每 g土样中产生 1mg酪氨酸为一个S-ACPT活力单位。
S-ACPT(mg/d/g)=C标准×(A测定管-A对照管)÷A标准管×V反总÷W÷T=48×(A测定管-A对照管)÷A标准管
C 标准管：标准管浓度，0.05mg/mL；V反总：反应体系总体积，0.4mL；T：反应时间，
30min=1/48d； W：样本质量，0.02g。
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