1.切片经二甲苯Ⅰ 5分钟。

2.切片经二甲苯Ⅱ 5分钟。

3. 无水酒精Ⅰ 30秒。

4. 无水酒精Ⅱ 30秒。

5. 95%酒精Ⅰ 30秒。

6. 95%酒精Ⅱ 30秒。

7. 90%酒精 30秒。

8.80%酒精 30秒。

9. 70%酒精 30秒。

10.自来水洗。(后面的切片脱蜡至水一般都是1-10)

11.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。

12.水洗。

13.抗原修复。

14.PBS洗3次，1分钟/次。

15.加入血清孵育20分钟。

16.摔干血清，加入一抗60分钟。

17.PBS洗3次，2分钟/次。

18.加入二抗孵育30分钟。

19.PBS洗3次，2分钟/次。

20.加入ABC复合物，孵育30分钟。

21. PBS洗3次，2分钟/次。

22.DAB-H2O2孵育切片5-10分钟。

23.PBS洗，水洗。

24.Harris苏木素染核5-10分钟。

25.水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。

(二)、LSAB法。(SP法)(Labelled streptavidim biotln)

1.切片脱蜡至水。

2.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。

3.水洗。

4.抗原修复。

5.PBS洗3次，1分钟/次。

6.加入血清孵育10分钟。

7.摔去血清，加入一抗孵育30-60分钟。

8.PBS洗3次，每次2分钟。加入二抗，孵育20分钟。

9.PBS洗3次，每次2分钟。

10.加入SP复合物孵育20-30分钟。

11.PBS洗3次，每次2分钟。

12.DAB-H2O2孵育5-10分钟。

13.PBS洗，水洗。

14.Harris苏木素染核5-10分钟。

15.水洗，分化 ，蓝化，脱水，透明并封固。

(三)真空负压LSAB法

1.切片脱蜡至水。

2. 0.3%H2O2甲醇真空负压处理5min.

3. 水洗。

4.如果需要，可进行抗原修复。

5.PBS洗3次，每次1分钟。

6.加入正常血清真空负压处理5min。

7.摔干血清，加入第一抗体，真空负压处理5分钟。

8. PBS洗3次，每次2分钟。

9. 加入二抗(即连接抗体)真空负压处理5分钟。

10.PBS洗3次，每次2分钟。

11.加入链卵蛋白复合物，真空负压处理 5分钟。

12.PBS洗3次，每次2分钟。

13.DAB-H2O2孵育5-10分钟。

14.PBS洗，水洗。

15.染核，分化，蓝化，脱水，透明并封固。

注：真空负压即将真空干燥中抽成真空。负压达66.7KPa(500mmHg)