LEGENDplex™多因子检测原理

BioLegend LEGENDplex™是基于荧光微球技术的免疫“双夹心”液相检测方法，反应原理类似于ELISA检测。13种微球各自具有不同强度荧光（APC），并依大小分为A、B两类，分别为6种和7种。微球分别耦连对应指标的捕获抗体，可捕获样品中或标准品中的目标蛋白，经过孵育和洗涤，与加入的检测抗体形成“双抗夹心”的三明治结构，再与加入的链霉亲和素-PE（SA-PE）反应，最后通过检测流式细胞仪PE和APC通道的信号强度，分别定性微球和定量分析物，并借助厂家提供的免费软件对数据进行分析。

LEGENDplex™的特点：

（1）可用于市面多数流式细胞仪

（2）预设panels（Th1/2/17等）、自选 panels 及定制服务可选

（3）免费的数据分析软件

（4）性价比高，单反应价格低于同类产品

（5）操作灵活，可在96孔板、EP管和真空吸滤板进行反应

试剂盒组成

试剂盒内包含荧光微球（预混或单独包装）、生物素标记的检测抗体、PE荧光素偶联的链霉亲和素标记、Assay Buffer 和Washing Buffer等缓冲液，以及96孔可真空抽吸板、dongle。

检测灵敏度

应用人类辅助性T细胞因子检测试剂盒分析细胞上清和血浆内的细胞因子为例（Human T Helper Cytokine Panels，Cat. No.740001）

在生物研究领域中的应用

人外周血单核细胞（PBMC）分别用LPS和CD3/CD28刺激2d和4d时间13种细胞因子的表达量（浓度单位：pg/ml）。

常见问题解答（一）

Q：LEGENDplex™方法适用的流式细胞仪有哪些？

A：可用于绝大多数流式细胞仪，如BD FACSCalibur™ ，BD FACSCanto™ ，BD FACSCanto™ II ，BDLSR™ I ，BD LSR™ II， BD LSRFortessa™ ， BD FACSAria™ I、 II 和 III ，请参照说明书的“终端用户需要准备的材料（ Materials to be provided by end-user ）”部分，了解对仪器和通道配置的要求。对于其他品牌流式仪（ Beckman Coulter、 Guava 等），使用时需要合理设置仪器参数。

Q：LEGENDplex™和Luminex®两种实验方法有什么不同之处？

A：LEGENDplex™和Luminex®都是基于荧光微球技术，通过形成“双抗夹心”的三明治结构，来检测样本中多种指标含量的免疫学实验方法。它们之间最大的不同是数据的收集方式， LEGENDplex™通过流式细胞仪完成数据的收集，而Luminex®是通过专门的仪器完成数据收集。相对Luminex®仪器来说，流式细胞仪的分布和使用更加普遍。只要实验室有可以利用的流式细胞仪，就能开展LEGENDplex™多因子检测实验。LEGENDplex™也不能在Luminex®的仪器上进行数据收集。

Q：厂家提供的免费分析软件是否对数据格式有要求？

A：只要流式细胞仪完成数据收集后能够生成FCS文件格式，通常是FCS2.0，3.0或3.1就可以用 LEGENDplex™ 分析软件进行分析（软件下载网址：biolegend.com/legendplex/software）。目前版本的软件只能在安装Windows 7或Windows 8 (32位或64位)系统的电脑上运行，与XP和Mac系统兼容的版本还在开发中。如果流式细胞仪连接的是Mac系统，需要在数据收集完成后将所有的原始数据（FCS文件）转移到个人电脑上再进行分析。