酵母细胞培养操作方法
1. 材料

酿酒芽殖酵母(Saccharomyces cerevisiae)和非洲粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces kephir)。

2. 试剂

1)酿酒芽殖酵母的培养基

(1)YPD(YPED)液体培养基(用于酵母菌摇培，100mL)

细菌培养用蛋白胨(Bacto-peptone) 2g

细菌培养用酵母提取物 (Bacto-Yeast extract) 1g

葡萄糖(Glucose，配成40%detrose贮液单独灭菌,4℃保存) 2g

加ddH2O至90mL，调pH值至4-5，定容至95mL，高温灭菌(121℃,15min)。待温度降至55℃时，加入5mL预热(至少室温放置30min)无菌的40%detrose贮液。

(2)YPD(YPED)固体培养基(可用于保菌或培养，100mL)

在YPD液体培养基的营养物中加入2g琼脂粉，加ddH2O至90mL，调pH值至5.8，定容至95mL，高温灭菌(121℃, 15min)。待温度降至55℃时，加入5mL预热(至少室温放置30min)无菌的40% detrose贮液。

(3)YPAD(斜面)培养基(可用于保菌或培养营养缺陷菌株，100mL)

在YPD液体培养基中加入硫酸腺嘌呤(Adenine hemisulfate salt，腺嘌呤半硫酸盐)40mg，琼脂(Bacto-agar)(液体培养基不加)2g。加ddH2O至90mL，调pH值至5.8(液体调至4左右)，定容至95mL，高温灭菌(121℃,15min)。待温度降至55℃时，加入5mL预热(至少室温放置30min)无菌的40%detrose贮液。分装培养基，倾斜放置形成斜面，每支试管依大小可加入3-5mL培养基。(若葡萄糖直接加入培养基则可先分装至试管后灭菌(需要棉塞)，灭菌会造成葡萄糖碳化，培养基略变褐色，对酵母培养会略有影响)。该培养基用于4-6个月的短暂保菌或酵母培养。

2)非洲粟酒裂殖酵母的培养基

(1)YE培养基(100mL)

酵母提取物 0.5g

葡萄糖(Glucose，配成40%detrose贮液单独灭菌，4℃保存) 2g

细菌培养用琼脂(Bacto-agar) 2g

加ddH2O至90mL，调pH值至5-6，定容至95mL，高温灭菌(121℃,15min)。待温度降至55℃时，加入5mL预热(至少室温放置30min)无菌的40%detrose贮液。

(2) YEA培养基(100mL)

YEA配方中含有150mg/L的腺嘌呤。用于培养尿嘧啶缺陷株的培养基，应加入150mg/L的尿嘧啶以利于最佳生长。

3. 仪器

恒温培养箱，恒温摇床，相差/微分干涉显微镜，普通光学显微镜

实验程序

1.酵母菌的摇培 无菌条件下，用接种环或微量取样器将酵母菌菌种接种于YPD液体培养基和非洲粟酒裂殖酵母的培养基，28-30℃,200rpm恒温摇床摇培过夜。

2.制片、压片，明视野显微观察。

3.相差显微镜的使用与标本观察。

4.液体培养基中细胞滴度的检测

5.分光光度测定法

1)YPAD过夜培养物用水稀释100倍。

2)用分光光度计测定600nm处的光密度。

3)记住稀释倍数，计算原始培养物的细胞数。