打开电脑

打开定量PCR仪底座开关

启动CFX Manager软件

放置样品

将PCR反应体系加入到0.2ml低缘八联管，盖上管盖；或加入低缘96孔板，用光学级封膜封好。注意，必须带一次性塑料手套，不要让手指接触到反应管表面。将反应管按顺序放入仪器的加热孔中。

设置程序，运行实验

定量PCR软件操作基本步骤为：a. 设置热循环程序文件（Protocol Tab） b.设置反应板文件（Plate Tab）。 C.点击“Start Run”键，运行程序热循环程序文件（Protocol Tab）设置指南：点击Edit（编辑）或 Create New（创建新程序）。

反应板设置文件（Plate Tab）设置指南：选择本次实验所要使用的荧光染料种类；单击样品类型；如要某些反应孔第一荧光染料对应的样品类型为标准品（Standard），点击“Dilution Series”键可设置其标准品浓度及稀释倍数。

点击“Start Run”键。单击open lid（打开热盖）或Close lid（关闭热盖）放置样品；单击Start Run，保存文件，开始运行程序。

结果分析

PCR反应结束后，软件会自动计算标准曲线和Ct值等。

如需进行表达量分析、等位基因分析等， 在软件窗口选择相应分析功能。

点击右上方的“Report”键，还可输出结果报告单

关闭运行仪器

实验结束后取出反应管，顺序关闭CFX Manager软件、定量PCR仪电源，关闭电脑。注意！CFX仪器上盖部分为全自动控制，在通电状态，严禁任何人为干涉上盖开启或关闭的行为，此类行为会导致上盖故障，危及仪器使用。