提供者:上海酶远生物科技有限公司 发布时间:2016/9/23 20:16:42 阅读次数:215次 进入该公司店铺
单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于ELISA,实际上有时候二者结合效果更好。例如,对于双抗夹心法而言,用多抗进行捕获而单抗进行检测有时更有帮助。多抗能够确保捕获所有抗原,随后单抗再特异性检测拥有特定抗原表位的抗原。
双抗夹心法ELISA中捕获抗体与检测抗体(不论多抗还是单抗)的配对很有讲究。我们不希望捕获抗体与检测抗体竞争抗原上的同一位点,为此我们就需要确保捕获抗体和检测抗体所识别的抗原表位不存在重叠。如果捕获抗体和检测抗体之间发生了冲突,就会对实验结果产生较大影响。要避免这一问题,我们可以选择购买“matched pair”的捕获/检测抗体对,这些打包在一起的抗体是商家经过验证才推荐的好组合。
实验类型的选购方法:
ELISA试剂盒有多种类型,不过它们都有一个共同特点,就是进行抗原捕获。一般捕获形式包括将抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗体进行捕获。In-cell ELISA和酶联免疫斑点ELISPOT是两种特殊的类型,In-cell ELISA需要将微孔板中培养的细胞进行固定和通透化,然后再用抗体原位检测。ELISPOT有点像蛋白印迹Western blot,先在带膜的微孔板中培养细胞,然后在膜上检测细胞分泌的抗原形成斑点。此外,我们还需要根据自身需要选择96孔板或是384孔板进行ELISA实验。
通常人们使用双抗夹心法进行ELISA实验,双抗夹心法中抗原被夹在捕获抗体和检测抗体之间,这种方法既灵敏又有效,受到了许多研究者的青睐。不过有时候双抗夹心法并不是最佳选择,例如有时候抗原特别小让两个大抗体难以附着,又或者抗体只有一个抗体结合位点。在上述情况下,竞争性ELISA试剂盒就更为适用,这种方法是采用带标记的纯化抗原与样本中无标记的抗原进行竞争,以结合捕获抗体
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