提供者：上海雅吉生物科技有限公司 发布时间：2016/8/16 10:45:51 阅读次数：319次 进入该公司店铺
| 实验材料 | 抗原血清 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 碳酸盐包被缓冲液PBSTBSA |
| 仪器、耗材 | 96孔酶标板4℃冰箱恒温培养箱分光光度计 |
| 实验步骤 | 一、包被抗原 1. 用50mM 的碳酸盐包被缓冲液（pH 9.6）溶解抗原，使抗原浓度为10-20 μg/ml，加100 μl/孔到96 孔酶标板，4℃放置过夜。 2. 第二天弃去包被液后，用PBST 洗涤3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封闭1 小时。 3. PBST 洗涤3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀释度的血清，并加入对照样品，37℃孵育2 小时。 4. PBST 洗涤5 次后，加入100μl 稀释后的HRP 标记的二抗，37℃孵育1 小时。 5. PBST 洗涤5 次后，显色剂显色20 min 后，酶标仪上读取A405 吸收值。 二、包被细胞 1. 在96 孔培养板上接种细胞数为1 x 104 cells/well，37℃过夜培养。 2. 第二天用PBS 洗涤培养板2-3 次。 3. 加入125 μl/well 10% Forma lin（1:10 稀释）, 室温下固定15 min。 4. 用ddH2O 洗涤培养板3 次，并晾干，储藏在2-8℃备用。 5. 用PBST 洗涤3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封闭1 小时。 6. PBST 洗涤3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀释度的血清，并加入对照样品，37℃孵育2 小时。 7. PBST 洗涤5 次后，加入100 μl 稀释后的HRP 标记的二抗,37℃孵育1 小时。 8. PBST 洗涤5 次后，显色剂显色20 min 后，酶标仪上读取A405 吸收值。50mM 的碳酸盐包被缓冲液：0.05mol/L pH9.6 碳酸缓冲液,4℃，保存,Na2CO3 0.15 克, NaHCO3 0.293 克,蒸馏水稀释至100 ml。 ABTS 作为底物进行显色反应(10ml)： ² 0.2M Na2HPO4 2.4ml ² 0.1M 柠檬酸2.6ml ² ddH2O 5ml ² ABTS 5mg ² H2O2(30%) 4 ul（用前加入） |
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