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南京信帆生物:蛋白凝胶染料随心选

提供者:南京信帆生物技术有限公司   发布时间:2016/5/24 22:16:27  阅读次数:4017次  进入该公司店铺

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刘**
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与DNA凝胶电泳一样,蛋白质凝胶电泳也是实验室中稀松平常的工作。无论是Western blot还是质谱分析,都离不开蛋白电泳。研究人员通过大小(1D)和电荷(2D)来分辨蛋白质。当然,仅仅分离蛋白是不够的,它们必须要经过染色。染料的选择有很多,具体选哪种,这取决于灵敏度要求、现有的设备和下游的应用。

常规之选

研究人员主要使用三种染料来处理日常的蛋白凝胶:考马斯蓝、银染和荧光。据Sigma-Aldrich公司蛋白技术的高级研发经理Jeffrey Turner介绍,染料的选择基本上可以归结为“灵敏度 vs. 速度”。

考马斯蓝也许是常用的染料。作为一种可见的显色(亮蓝色)染料,它不需要任何特殊的设备。不过,Bio-Rad的业务开发经理Ning Liu认为,它的灵敏度也低,检测极限大约在10-100 ng蛋白质。

很多公司提供不同配方的考马斯蓝染料,它们在使用简便程度、整体染色时间和脱色要求上各有不同。例如,有些需要在乙醇/乙酸中固定,而有些只使用纯水。Expedeon的InstantBlue™试剂可在电泳后直接添加到凝胶中,而不需要固定或脱色,染色可在15分钟内完成。Bio-Rad的QC Colloidal Coomassie Stain操作则建议慢慢来,以便达到更好的效果。整个过程包括在40%乙醇/10%乙酸中固定15分钟,之后染色1-20个小时,再脱色1-3小时。

有了赛默飞世尔新推出的Pierce™ Power Stainer,研究人员可以让考马斯蓝染色自动化。据它的产品经理Emily Goplen介绍,这台设备可对两块凝胶进行染色和脱色。“尽管传统的染色需要几小时甚至过夜,Power Stainer却能在10分钟内完成染色和脱色的过程,并且预制胶和自制胶都适用,”她说。

另一种常用方法是银染,每条带的灵敏度大约在0.1-0.25 ng。操作过程没有脱色步骤,但是一个很长的过程,大约在2小时左右,而且相当讲究。此外,据Turner介绍,操作需要用到一些有害的化学物质,如甲醛和银,好在通风橱中进行。因此,人们一般不大愿意用这种方法,除非灵敏度很重要。

荧光染料的灵敏度则居中,可检测几纳克的蛋白质,不过你得有一个兼容的凝胶成像系统或透射仪。与考马斯蓝和银染一样,荧光染色通常在电泳后进行,需要固定和脱色,不过也有例外。例如,SYPRO Ruby需要脱色,但Oriole和Flamingo不需要,因为游离的染料不发荧光。“染料本身不会被激光激发,只有当它与蛋白结合时才被激发,”Liu解释道。

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