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细胞凋亡检测实验步骤

提供者:上海雅吉生物科技有限公司   发布时间:2016/3/15 8:06:41  阅读次数:276次  进入该公司店铺

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1. 凋亡细胞的制备
小鼠腹腔注射地塞米松25 mg/kg体重,10 h后解剖取胸腺,分离胸腺细胞。用PBS洗两遍,调整待测细胞的浓度为2×106 /ml,备用。
2. 200 μl细胞悬液加入1 ml冷PBS,轻轻震荡使细胞悬浮,1000 rpm 4 ℃离心10 分钟,弃上清。
3. 重复步骤2两次。
4. 将细胞重悬于200 μl 标记缓冲液。
5. 加入10 μl Annexin V-FITC,轻轻混匀,避光室温反应15 分钟或4 ℃反应30 分钟。
6. 加入300 μl标记缓冲液,立即上机(流式细胞仪)检测。
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔,切勿用力吹打细胞,尽量在4 ℃下操作。
2. 反应完毕后要尽快检测,因为细胞凋亡是一个动态的过程,反应一小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC是光敏物质,在操作时要注意避光。

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