1 仪器与试药

UltiMate 3000型高效液相色谱仪(德国戴安公司)；AEU一210 型电子天平(日本岛津公司)。蛇床子素对照品(中国药品生物制 品检定所，批号为110822—2004)；实验用中药材均购自十堰市中 药材公司；复方苦参子洗液(医院自制，批号分别为20091023， 20100120，20100316)；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：DL—CI8柱(150mm x4．6mill，5¨m)；流动相：甲醇一 水一磷酸(65：35：0．1)；流速：1．0 mL／min；检测波长：322 inn；进 样量：20 L；柱温：30℃ 。

2 2 溶液制备

精密称取蛇床子素对照品5．6 mg，置25 mL棕色量瓶中，加甲 醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得224~g／mL的对照品溶液，置 4℃ 冰箱中保存备用。精密吸取样品溶液20 mL，用提取3次， 每次20 mL，合并液，60 qC以下蒸干，残渣加甲醇溶解并转移 至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0．45 m) 滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取除蛇床予外的其他处方量药 材，按制备工艺制成缺蛇床子药材的阴性样品，按供试品溶液制备 方法制成阴性对照溶液。

2．3 方法学考察

系统适用性试验：取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶 液各2O ，依法进样测定。结果供试品溶液中蛇床子素色谱峰与 其他组分色谱峰可达基线分离，理论板数按蛇床子素计算不低于 2 000，阴性对照品溶液对测定无干扰(图1)。

线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液0．1，0．5，1．0，2．0， 3．0，5．0mL，置10mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，制成不同质量浓度的溶液，分别精密吸取上述 溶液各2O ，注人液相色谱仪， 测定峰面积。以蛇床子素的进样 量( )为横坐标、峰面积(1，)为纵 坐标绘制标准曲线，得线性回归 方程，，=1，543 5 一0．145 8，r= 0．999 5(n=6)。结果表明，蛇床子 素进样量在0．044 8～2．24 g范 围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取质量浓度为 22．4 p~g／mL的对照品溶液，重复 进样6次，每次20 L，测定峰面 积。结果的RSD为1．47％(n=6)， 表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，室温放置，分别在0， 2，4，6，8，12 h时进样测定峰面积。结果的RSD为1．81％(n=6)， 表明处理后所得供试品溶液在12 h内稳定。

加样回收试验：精密吸取已知含量(10．443 2~xg／mL)的样品 6份，每份10 mL，精密加入蛇床子素对照品适量，按供试品溶液制 备方法制备溶液，进样测定含量，计算回收率。结果见表1。

2 4 样品含量测定

分别精密称取3批样品20 mL，按供试品溶液制备方法制备溶 液，注入高效液相色谱仪，依法测定峰面积，按外标法计算蛇床子 素含量。结果批号为20091023，20100120，20100316的3批样品 中，蛇床子素含量分别为10．44，9．75，9．58 p,g／mL。

3 讨论

蛇床子为本方君药，主要有效成分为具有广谱抗菌活性的香豆素类化合物，而蛇床子素为活性最强的成分，故本试验以蛇床子 素为含量测定指标，在文献方法的基础上 。 ，结合本品药味的性 质，确定了提取条件和测定方法，建立了质量控制标准。结果表明，高效液相色谱法操作简便、重现性好，结果令人满意。