竞争抑制ELISA又叫封闭ELISA,其主要原理是用待检抗原或抗体去干扰已经预先设计好的体系,最终显色的结果与待检。抗原或抗体的干扰程度成负相关。竞争抑制ELISA灵活性很强,可以在此基础上设计出更复杂的实验方案,从而派生出所谓的直接竞争抑制ELISA、间接竞争抑制ELISA、夹心竞争ELISA等特殊的ELISA方法。这里仅以直接竞争抑制ELISA和间接竞争抑制ELISA为例简单阐述原理。 直接竞争抑制ELISA:直接竞争抑制ELISA中,预先将抗原包被在固相载体上,并加入酶标的特异性抗体。实验时,加入待检抗原(或抗体),如果待检对象是抗原,则待检抗原就与预先包被在固相载体上的抗原竞争结构酶标抗体;如果待检测对象是抗体,则待检抗体就与系统中原有的酶标抗体竞争结合包被在固相载体上的抗原。洗涤过程就可以洗掉被竞争下的酶标抗体,最后加底物显色。最终显色的结果与待检原(或抗体)量成反比。注意在直接竞争抑制ELISA中,同一预制备的体系既可以测定抗原,也可以测定抗体。
直接竞争抑制ELISA:直接竞争抑制ELISA中,预先将抗原包被在固相载体上,并加入酶标的特异性抗体。实验时,加入待检抗原(或抗体),如果待检对象是抗原,则待检抗原就与预先包被在固相载体上的抗原竞争结构酶标抗体;如果待检测对象是抗体,则待检抗体就与系统中原有的酶标抗体竞争结合包被在固相载体上的抗原。洗涤过程就可以洗掉被竞争下的酶标抗体,最后加底物显色。最终显色的结果与待检原(或抗体)量成反比。注意在直接竞争抑制ELISA中,同一预制备的体系既可以测定抗原,也可以测定抗体。
如同间接ELISA一样,直接竞争抑制ELISA也有两步信号放大的过程,因此其灵敏度也比较高,但是预先包被好固相载体并加入酶标抗体后,实验时只需要将待检抗原或抗体稀释后加到体系中进行反应即可,大大简化了ELISA的操作过程。直接竞争抑制ELISA 间接竞争抑制ELISA可以看作是用待检抗原或待检抗体干扰一个预先制备的间接ELISA系统。其具体原理是:将抗原包被于固相载体上,依次加入特异性的抗体以及此抗体对应的酶标二抗作为预制备的体系。实验时,加入稀释好的待检抗原(或抗体),待检标本中的抗原(或抗体)就和预制备体系中固相载体上结合的抗原(或抗体)竞争结合特异性的抗体(或固相载体上结合的抗原)同间接ELISA一样,间接竞争抑制ELISA也有三步信号放大的过程,所以其灵敏度也比直接竞争抑制ELISA高。 从上述原理可以看出,竞争抑制ELISA对试剂的要求非常少,不管是单抗还是多抗都可以用于实验,更重要的是不管被检对象是大分子物质还是多肽、小分子药物、小分子激素等只有一个表位的分子不能使用夹心ELISA的都可以使用竞争抑制ELISA检测。另外,像乙肝标志物检测中,e抗原很不稳定,容易降解变为核心抗原,因此在检测e抗体时不能用夹心ELISA检测而只能选用竞争抑制ELISA。 除以上介绍的几种基本的ELISA外,人们还可以根据自己的实际需要灵活设计其它类型的ELISA,例如可以引入生物素-亲和素提高系统的放大倍数,再如引入非酶标二抗或者Protein A、Protein G等增加固相载体的载量或者增加系统的特异性等。
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