原核细胞体外翻译系统实验步骤_分析方法_仪器仪表技术文献

原核细胞体外翻译系统实验步骤

提供者：上海雅吉生物科技有限公司发布时间：2015/12/30 10:06:54 阅读次数：1086次进入该公司店铺

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―、材料与设备

1）无核酸酶的水。

2）[35S] 标记的甲硫氨酸（1.25×10-5mol/L12000Ci/mmol）

3）1 mmol/L 缺少中硫氨酸的氨基酸混合物

4）缺少氨基酸的 S30 反应混合液（Promega 公司）

5）适用于杯状 DNA 的 S30 提取物（Promega 公司）

6）适用于线状 DNA 的 S30 提取物（Promega 公司）

7）适用于环状 DNA 的 T7S30 提取物（Promega 公司）

8）—70℃ 冰箱

9）微量移液器

10）离心机

11）冰浴

二、操作方法

（一）适用于对环状 DNA 进行体外翻译的大肠杆菌 S30 提取物系统

2）轻轻涡旋，然后离心 5s, 以使反应混合物沉入管底。

3）37℃ 孵育 1〜2 h。

4）将反应管置于冰浴上 5 min, 以终止反应。

5）分析试验结果。利用三（TCA）免疫沉淀实验和 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳以分析产物，

（二）适用于对线状 DNA 进行体外翻译的大肠杆菌 S30 提取物系统

具体操作步骤同「（一）适用于对环状 DNA 进行体外翻译的大肠杆菌 S30 提取物系统」中的 1）〜5）。反应体系如表 4.2 所示

（三）适用于对环状 DNA 迸行体外翻译的大肠杆菌 T7S30 提取物系统

具体操作步骤同「一）适用于对环状 DNA 进行体外翻译的大肠杆菌 S30 提取物系统」中的 1）〜5），反应体系如表 4.3 所示；