自动扫描型分光光度计计量检定中若干问题的分析与对策

关键词：自动扫描型 UV-1800SPC 分光光度计

分光光度计是实验室常用的精密仪器，在医院中有着广泛的应用，主要用于测量溶液的浓度。分光光度计属于计量强制检定项目，检定周期应<1年。目前的检定规程为中华人民共和国国家计量检定规程JJG 178-2007“紫外、可见、近红外分光光度计检定规程”。该规程对自动扫描型仪器的检定方法描述并不多，有些参数不可设置，在此介绍一些检定技巧。

2计量中的常见问题与使用技巧
2.1波长准确度的对比设定值
波长准确度的测量在规程中指定了9种标准物质可供选择。由于滤光片使用方便，价格低廉，成为应用最广泛的标准物质。通常采用氧化钬滤光片，通过全波段扫描，找到其吸光度出现波谷的波长，然后与给定值进行比较，可得到波长示值误差的数值。需要说明的是，虽然氧化钬具有固定的参考波长，但在实际计算中应选用具有标准物质校准资格的机构校准的 波长为准，并应定期进行校正。
2.2滤光片标号的含义
测量杂散光时，需要用到波长分别为220nm、 360nm和420nm的截止滤光片。截止滤光片上印有编号，编号的数字x10即为标称测试波长。所以应选择 22号、36号和42号截止滤光片。截止滤光片类似于一个高通滤波器，其截止波长应分别>225nm、365nm 和430nm[8]。同理，干涉滤光片也是以编号数字x10 作为标称峰值波长，中性滤光片以编号数字x10作为 标称透射比。
2.3吸收池配套性
分光光度计的吸收池是成对配套，分为玻璃和 石英两种材质。由于玻璃吸收紫外光，其适用波长为 400~2000nm;石英适用波长为180~3000nm。按照检定规程，配对的吸收池透射比的差值<0.5%。为保证其配套性，2个吸收池尽量同时使用，注意保养。使用时样品液应达到2/3的高度，且注意不要溢出＇使用完后用蒸馏水清洗同样的次数，拭镜纸单向擦干。一般使用1年后吸收池的配套性会变差，应重新配对。
2.4基线平直度调整
基线平直度是指扫描透射比为100和0时基线倾斜 或弯曲的程度。如果基线的平直性差，就会使样品的吸收光谱中各吸收峰之间的比值发生变化，给定性分析造成错误。导致基线不平直的主要原因是仪器的光 学系统失调，两光束不平衡。如仪器受震动，光源位置变动等都会引起光学系统故障（基线平直度要以吸光度表示）。有些设备对基线平直非常敏感，容易超出规程标准，因此在进行此项测量时要使机器充分预热，光谱带宽设为2 nm，并且在仪器遮光罩关闭后稳定2 min后再进行波长扫描。
2.5光谱带宽调整
规程中对噪声、漂移、最小光谱带宽和基线平直度几个项目的测定需要调整光谱带宽。光谱带宽是由狭缝宽度决定，理论上，光栅型仪器当狭缝宽度小于衍射宽度时，光谱带宽由衍射宽度决定；当狭缝宽度大于衍射宽度时，光谱带宽由狭缝宽度决定。狭缝越小，得到的单色光越纯，但光的强度降低。目前有很多仪器为固定光谱带宽，而规程规定在测量时设置为2nm，固定光谱带宽仪器可不设。事实上，当光谱带宽不能设置时，容易使光电流的噪声偏大。
2.6扫描速度选择
进行波长最大允许误差的测量时，需要对氧化钬滤光片进行波长扫描。为节省时间，设定波长范围只需包含所要同标准值对比的波峰波谷即可。首先要对照上一次的检测报告或仪器说明书明确仪器波长重复性，设置使采样间隔小于波长重复性的扫描速度。如果不能设定采样间隔，则应设定扫描速度<120nm/ min。进行基线平直度测量时，全波段扫描的速度应选择采样间隔为1nm的速度，若不能设置，则可选择 400~800nm/min。
2.7波长分段与仪器级别
在紫外、可见、近红外分光光度计检定规程中， 增加了对仪器的工作波长及仪器性能级别的划分。 其工作波长分为A段、B段和C段。仪器性能从高到低分为4个级别,即I级、II级、III级、IV级。仪器的每一项计量指标均应根据级别划分标准。因此，应对照规程在计量证书中给出每项指标在每个波段的仪器级别，以方便使用者对仪器性能有更好的判断。
3光学器件的维护与保养
光学器件忌灰尘和触摸，要保证使用环境的清洁， 滤光片使用完后要及时放回暗盒中。如光学器件粘有少量灰尘，可用小功率吸尘器处理。当环境湿度过大或 PM2.5含量过高，也会对测量准确度造成影响。分光光度计属于精密仪器应尽量避免搬动，以免造成光路的轻微改变，仪器不用时应关闭电源，延长其光源寿命。