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小谈脂肪酶活性测定方法

提供者:恒远免疫学第三方检测中心   发布时间:2015/10/30 16:20:08  阅读次数:250次  进入该公司店铺

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陈**
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方法:
1、粗酶液的制备
用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸馏水溶解并定容至100 mL, 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。
2、实验设计
本实验以10 mL色拉油为底物,以酶用量、水解温度、反应时间为因素,通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。
3、酸价的测定
酸价是指中和1 mol游离脂肪酸所需NaOH的毫克数, 它用于衡量油脂的水解程度。实验中用酸碱滴定法测定水解液的酸价, 参照文献[ 3, 4 ]中所使用的方法, 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液, 摇匀, 终止反应, 并加入2滴酚酞指示剂, 迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微红色, 在30 s内不消失为终点, 记录消耗的NaOH溶液毫升数(V ) 。用同样的方法测定空白值, 每个试验重复两次, 以平均值作为测定结果。
酸价按下式计算:
X = C (V - V0 ) ×40 /M
式中: X —油脂酸价(mgNaOH /g油)
C—NaOH标准溶液的浓度(mol/L)
M —试样的质量( g)
40—NaOH的mmol质量(mg/mmol)
4 粗脂肪酶活力的测定
在最佳水解条件下, 分别测得粗脂肪酶和标准脂肪酶水解液的酸价X1、X2 , 根据公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力, 其中U1为粗脂肪酶活力, U为标准脂肪酶活力。

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