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技术要点:ELISA试剂盒实验过程之显色

提供者:上海恒远生物技术发展有限公司   发布时间:2015/10/16 10:38:57  阅读次数:3741次  进入该公司店铺

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上海恒远生物科技有限公司主要经营elisa试剂盒 、生物试剂、血清、抗体、培养基等科研产品。产品种类齐全,畅销国内大部分地区 ,销售额逐年稳步提高。我司拥有雄厚的实力、合理的价格和优良的服务,能够及时解决和满足客户的各方面的需求。ELISA试剂盒是我司的主打产品,在ELISA实验中,每个步骤都需认真对待,才能使实验准确无误!下面让我们一起了解ELISA试剂盒实验过程之显色!
显色是ELISA中的最后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中,加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测定的显色可在室温进行,时间一般不需要严格控制,有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色情况适当缩短或延长反应时间,及时判断。
OPD底物显色一般在室外温或37℃反应20-30分钟后即不再加深,再延长反应时间,可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色,显色反应应避光进行,显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD产物用酸终止后,显色由橙黄色转向棕黄色。
TMB受光照的影响不大,可在室温中置于操作台上,边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性,宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后,约40分钟显色达顶峰,随即逐渐减弱,至2小时后即可完全消退至无色。TMB的终止液有多种,叠氮钠和SDS等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24小时)不褪,是目视判断的良好终止剂。此外,各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色,此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值。

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