本试验采用改良过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记在抗体上[1]，标记完后取上清用Sephedex G200 凝胶层析进行纯化，洗脱液为0.2mol/L pH7.4的PBS，流速为15ml/h，分步收集，每支3ml，以紫外分光光度计测A280吸光度值，以洗脱体积为横坐标，吸光值为纵坐标做图，收集第一峰即为酶标抗体峰。标记完后用紫外分光光度计在分别在280nm、及403nm处测定酶标记物的A值，计算免疫球蛋白量、摩尔比值、酶结合率以及标记率。

二、包被用缓冲液及最适包被抗原浓度的优化

1、包被缓冲液的优化

包被抗原时，为了得到最佳的包被效果，我们采用了碳酸盐缓冲液（50mM ph9.6 ）、磷酸盐缓冲液（50mM ph7.6）、以及TRIS盐酸缓冲液（50 mM ph7.6）三种缓冲液作为包被液，抗原包被浓度为5ug/ml，及2.5ug/ml,酶标抗体工作浓度为1：400及1：300，用自动酶标仪分析，选择最佳的包被缓冲液系统。同时为了保证缓冲液能够长期保存，我们在包被液中添加了0.01%的硫柳汞作为防腐剂。

2、最适抗原包被浓度的优化

用优化好的包被缓冲液，将包被抗原（ALB）稀释成0.1ug/ml，1.0ug/ml，2.0ug/ml，4.0 ug/ml，6.0 ug/ml，8.0 ug/ml，10.0 ug/ml等六个浓度，包被微孔板，每孔100ul；竞争抗原浓度为4.0 ug/ml，2.0 ug/ml；酶标抗体稀释度为1：300，经孵育、显色、终止后用自动酶标仪分析。显色的强度在一定范围内与包被的抗原量成正比，但随着包被抗原浓度的增加，显色的强度反而降低，我们选择临界包被值作为包被抗原量。

ANKRD20A3锚蛋白重复结构域蛋白20A3抗体

ANKRD22锚蛋白重复结构域蛋白22抗体

ANKRD50锚蛋白重复结构域蛋白50抗体

ATP6V1G2氢离子转运ATP合成酶6G抗体

ANKRD26锚蛋白重复结构域蛋白26抗体

ANKRD26锚蛋白重复结构域蛋白26抗体

ACY3丙型肝炎病毒核结合蛋白-1抗体

ARSK芳香基硫酸酯酶K抗体

Amphiphysin神经元突触前膜蛋白抗体

Ankyrin G锚定蛋白G抗体

Actin肌动蛋白α/α-SMA/α Actin抗体

ADAMTS1整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型抗体

ADAMTS7（NT）整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7抗体 （N端抗体）

ADAMTS7整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7抗体

beta Adducin内收蛋白抗体

ADFP脂肪组织分化相关蛋白抗体

Adiponectin Receptor 1脂联素受体1抗体

ADM R肾上腺髓质素受体抗体

Adiponectin脂联素抗体

ADM肾上腺髓质素抗体

Adenosine A3 Receptor腺苷受体A3抗体

ADRA2ADRA2肾上腺素能受体2抗体