试验方法


以凝胶法占绝大多数，主要原因是凝胶法为药典收载，方法成熟，操作简便，而其它方法由于多种限制，尚未普及应用。


2.1　供试品阳性对照　黄清泉〔1〕认为应增加供试品阳性对照，即在0.1 ml鲎试剂中加入用供试品溶液制成的2λ标准内毒素溶液。最终结果阴性对照呈阴性，阳性对照和供试品阳性对照均呈阳性，试验结果方有效。设阳性对照是证明在试验条件下所用鲎试剂的灵敏度符合规定；设阴性对照证明所用检查用水中检不出内毒素；设供试品阳性对照则是证明试验条件下供试品溶液不存在抑制因素。


2.2　试验重现性差　同一品种不同实验者所得结果不一致。如2 g/L环丙沙星注射液，杜氏〔2〕稀释一倍，胡氏〔3〕则将样品1∶6稀释。张嘉丽〔4〕认为葡萄糖氯化钠注射液需1∶1稀释，伊氏〔5〕未稀释。蔡红〔6〕发现在鲎试剂均符合药典规定前提下，同一品种生产厂家不同结果不同。笔者以为上述问题的根源是鲎试剂标准化问题。鲎试验系统工程化〔7〕（试剂标准化、鲎试验仪测化、实验室标准化、试验器具优化、操作规范化）对于提高该方法的整体应用水平，解决重现性差的问题，将起重要作用。


2.3　检品供试液pH值　高国政〔8〕用动态浊度法研究pH值对细菌内毒素测定的影响，比较TAL（东方鲎试剂）和LAL（美洲鲎试剂）的不同。结果显示两种鲎试剂回收曲线都呈现三个反应高峰，分别为pH5.20，pH7.83/pH6.23和pH10.55。样品pH值6～8，实验结果稳定；pH值≤3或≥12，试验受到抑制。使用TAL，检品pH预调在6.5～7.5，使用LAL，检品pH应预调在6.2±0.1或6.7～7.8。


2.4　直接稀释法〔9〕　根据稀释倍数计算出每支样管需要加入药品原液及溶解用水的体积（两者之和为0.2 ml），准确吸取混合，不必另外稀释检品，可以减少中间污染环节，操作亦简便易行。


2.5　药品生产过程质控标准　侯庆源〔10〕抽取出现散在热原反应的生理盐水，用细菌内毒素检查法定量考察，发现内毒素浓度大于0.5 EU/ml（不合格）者占62.5%，而且样本之间有明显差异，提示可能与输液瓶清除热原效果差异及散在污染因素有关。