抗原提呈细胞、抗原以及抗原特异性T杂交瘤细胞混合放在96孔板中共同孵育，一段时间以后，测定上清中抗原特异性T杂交瘤细胞分泌的IL-2水平即可反映抗原提呈的作用。如果是可溶性抗原可选用DC作为APC，而如果是颗粒性抗原或者脂类包被的抗原，则应选用巨噬细胞作为APC，所选的APC应与T杂交瘤细胞具有相同的MHC约束性。

主要试剂与器材

1、APC（此处选用腹腔渗出细胞）、T杂交瘤细胞、抗原。

2、DMEM培养液、96孔平底培养板。

3、IL-2ELISA试剂盒

4、离心机、CO2培养箱。

操作步骤

1、收集腹腔渗出细胞，以DMEM调整细胞浓度为2×106/ml，加入96孔平底培养板中，每孔100μl。

2、收集新鲜培养的T杂交瘤细胞，室温1000rpm离心10min。以预温至37℃的DMEM培养液调整细胞浓度为2×106/ml。加入上诉96孔培养板中，每孔50μl。

3、配置1mmol/L的抗原工作液，以DMEM液作系列稀释，一般以对数（1:10）或半对数（1:3.16）稀释为宜。

4、将系列稀释的抗原溶液加入96孔板中，每孔50μl。每个浓度做3复孔，同时以不加抗原孔作为阴性对照。

5、将96孔板置37℃，5%CO2培养箱中培养20~24h。

6、取出96孔板，1200rpm离心10min。

7、吸取上清，-80℃冻存待测，或直接用IL-2elisa试剂盒或细胞生物学方法检测上清液IL-2含量。

注意事项

1、配制抗原溶液及进行系列稀释时，培养板应置于37℃培养箱中。

2、以合成肽作为抗原时，肽应溶解于去离子水中，1mmol/L的工作液4℃可保存数日，应避免以含盐缓冲液溶解肽，因为盐可引起肽沉淀。如果以蛋白作为抗原时，则可将蛋白直接溶解于DMEM培养液中，立即使用。

3、APC、抗原及T杂交瘤细胞加入次序不限。