试验前标本需缓慢升温至室温，若标本为血清，冻结血清融解後，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清後再检测；
加样时应将所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出；
加样後及时放入孵箱；
加酶试剂後用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干；
如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他後处理仪器加酶试剂；
标本较多时，请分批操作。每次加样最好在两到三分钟内完成。加标本时最好三排一加。每次加完样进行计时；
参考ELISA#加样
温 育：
不好的操作原因：
温育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；
温育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。
解决办法：
贴封片或加盖：为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜复盖板孔，反应板不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。
elisa试剂盒步骤严格控制操作时间。
建议采用空气浴进行温育。
参考ELISA实验操作中的温育（incubation）
洗 板：
结果不好的可能原因
采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。
反应板过多造成洗板等待时间长。