实验原理

本人β-防御素试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人β-防御素2（HβD-2）水平。用纯化的人β-防御素2（HβD-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β-防御素2（HβD-2），再与HRP标记的β-防御素2（HβD-2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的β-防御素2（HβD-2）呈正相关elisa试剂盒。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人β-防御素2（HβD-2）浓度。

试剂盒组成

1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶

2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（320pg/ml） 0.5ml×1瓶

3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶

4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份

5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张

6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个

标本要求

1．人β-防御素标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。显色：人β-防御素每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，ELISA试剂盒37℃避光显色15分钟.

终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。