1．分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。人丙二醛（MDA）每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育60分钟。
2．弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。
3.人丙二醛（MDA）Elisa试剂盒每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
4.取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
5.测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。?测定应在加终止液后15分钟以内进行。
6.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，人丙二醛（MDA）再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。

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